Čo je RNA vírusu hepatitídy C?

Štúdia RNA vírusu hepatitídy C je najdôležitejším postupom, ktorý umožňuje stanoviť trvanie a metódy liečby pacientov s veľkou presnosťou. Diagnóza ochorenia pozostáva z niekoľkých rôznych krvných testov, ako napríklad:

• markery hepatitídy C (anti-HCV);
• detekcia RNA vírusu hepatitídy C (HCV RNA).

Prvá štúdia sa uskutočňuje s prvým podozrením na hepatitídu. Druhá možnosť je najvýznamnejšia v liečbe HCV RNA, preto ju bližšie zvážte.

Čo je vírusová hepatitída C?

Vírusová hepatitída C alebo HCV je infekčné ochorenie postihujúce pečeň. Infekcia vírusom sa prejavuje krvou. Môžete sa nakaziť transfúziou krvi, keď sa nedodržiavajú pravidlá pre sterilizáciu lekárskych nástrojov. Existuje menej prípadov, kedy sa ochorenie získava sexuálne alebo od tehotnej matky k plodu. Hepatitída C je 2 typy.

Chronická hepatitída C je najnebezpečnejšia. Je to forma choroby, ktorá môže trvať celý život. Vedie k vážnym problémom vo fungovaní pečene, ako je cirhóza alebo rakovina. U 70-90% infikovaných ľudí prechádza choroba do chronickej fázy.

Najdôležitejšie nebezpečenstvo hepatitídy C spočíva v tom, že dochádza tajne, bez ikterických príznakov. V tomto prípade sa najčastejšie sťažujú na horúčku, nevoľnosť a zvracanie, telesnú slabosť, zvýšenú únavu, stratu chuti do jedla a hmotnosť. V tomto prípade sa na malom zhutnení pečeňových tkanív často vyskytuje malígna degenerácia. Z tohto dôvodu sa vírusová hepatitída C často nazýva "časová bomba" alebo "láskyplný zabijak".

Ďalšou zvláštnosťou tejto choroby spočíva v jej veľmi pomalom vývoji, odhadovanom desiatkami rokov.

Spravidla infikovaní necítia žiadne príznaky a neočakávajú ich skutočný stav. Často sa choroba môže zistiť iba vtedy, keď sa odvolávame na lekára o inej problematike.

Riziková skupina zahŕňa:

• deti, ktoré dostali vírus hepatitídy C od matky;
• drogovo závislých;
• ľudia, ktorí prepichli časti tela alebo robili tetovanie nesterilnými nástrojmi;
• dostala darcovskú krv alebo orgány (až do roku 1992, kedy nebola vykonaná hemodialýza);
• ľudí infikovaných vírusom HIV;
• Zdravotnícki pracovníci v kontakte s infikovanými pacientmi.

Určenie hepatitídy C RNA

Stanovenie RNA vírusu hepatitídy C, tiež nazývaný hepatitídy C PCR tejto štúdie biologického materiálu (krv), s ktorou možno identifikovať v tele okamžitej dostupnosti genomateriala vírusu hepatitídy B (nejaký daný vírus je jediná častica RNA).

Hlavnou skúšobnou metódou je PCR alebo metóda polymerázovej reťazovej reakcie.

Existujú dva typy krvných testov na stanovenie HCV RNA:

Skúška kvality

Vykonávanie kvalitatívnej analýzy umožňuje zistiť, či je vírus v krvi. Všetci pacienti, ktorí majú protilátky proti hepatitíde C, majú podstúpiť tento test. Jeho výsledkami získate 2 odpovede: "prítomný" alebo "chýba" vírus. Na základe výsledku pozitívneho testu je možné posúdiť aktívne násobenie vírusu, ktorý infikuje zdravé bunky v pečeni.

Test, vykonaný na vysokokvalitnú PCR, je naladený na špecifickú citlivosť od 10 do 500 IU / ml. Ak sa vírus hepatitídy nachádza v krvi so špecifickým obsahom menším ako 10 IU / ml, detekcia vírusu môže byť znemožnená. Veľmi nízka hodnota špecifického obsahu vírusu sa pozoruje u pacientov, ktorým je predpísaná antivírusová liečba. Preto je dôležité, aby citlivosť zdravotníckeho systému bola vysoká na diagnostikovanie a stanovenie kvalitatívneho výsledku pri polymerázovej reťazovej reakcii.

Často sa polymerázová reťazová reakcia C-hepatitídy uskutočňuje ihneď po nájdení zodpovedajúcich protilátok. Nasledujúce testy, keď prechádza antivírusová liečba, sa vykonávajú v 4., 12. a 24. týždni. A ďalšia analýza po ukončení PVT sa vykonáva po 24 týždňoch. Potom - raz za rok.

Kvantitatívny test

Kvantitatívna analýza PCR RNA, niekedy označovaná ako vírusová záťaž, určuje koncentráciu (špecifický obsah) vírusu v krvi. Inými slovami, vírusová záťaž je definovaná ako určité množstvo vírusovej RNA, ktorá môže byť v špecifickom množstve krvi (zvyčajne sa v kocke používa 1 ml, čo je 1 cm). Jednotky pre výsledky testov sú medzinárodné (štandardné) jednotky, rozdelené o jeden mililiter (IU / ml). Obsah vírusu niekedy vyzerá inak, závisí to od laboratórií, v ktorých sa výskum vykonáva. Pri hepatitíde C kvantifikácia niekedy používa hodnoty, ako sú kópie / ml.

Malo by byť zrejmé, že neexistuje žiadna špecifická závislosť na závažnosti C-hepatitídy na koncentrácii tohto kmeňa v krvi.

Kontrola "vírusovej záťaže" vám umožňuje určiť stupeň infekčnosti choroby. Takže riziko kontaktu s vírusom inej osoby sa zvyšuje s nárastom koncentrácie hepatitídy v krvi. Navyše vysoký obsah vírusu znižuje účinok liečby. Malá vírusová záťaž je preto veľmi úspešným faktorom úspešnej liečby.

Okrem toho test hepatitídy C a jeho stanovenie pomocou PCR zohrávajú veľkú úlohu pri aplikácii terapie proti ochoreniu a pri určovaní úspešnosti liečby. Na základe výsledkov testov sa plánuje rehabilitačný kurz. Napríklad s príliš pomalým poklesom špecifickej koncentrácie vírusu hepatitídy sa predĺži antivírusová terapia a naopak.

V modernej medicíne sa predpokladá, že zaťaženie je vyššie ako 800000 ME / ml je vysoké. Zaťaženie je vyššie ako 10000000 ME / ml. Odborníci z rôznych krajín a dodnes nemali rovnaký názor na hranice vírusovej záťaže.

Frekvencia kvantitatívneho testu

Vo všeobecnosti sa kvantitatívna analýza hepatitídy uskutočňuje pred antivírusovou liečbou a 3 mesiace po ukončení liečebných postupov na určenie kvality liečby.

Výsledkom kvantitatívneho testu bude kvantitatívne vyhodnotenie výsledkov vyššie uvedenej vzorky. V dôsledku toho sa vykreslí verdikt "pod meraným rozsahom" alebo "v krvi nebude zistený".

Parameter citlivosti kvalitatívneho testu je zvyčajne nižší ako citlivosť kvantitatívnej analýzy. Chýbajúci prepis naznačuje, že oba typy analýz nenašli RNA vírusu. S testom "pod meraným rozsahom" kvantitatívna analýza pravdepodobne nenašla hepatitídu RNA, hoci to potvrdzuje prítomnosť vírusu s veľmi malým špecifickým obsahom.

Hepatitída C a jej genotypy

Genotypizácia vírusu hepatitídy C RNA diagnostikovať prítomnosť rôznych genetických typov hepatitída C. Veda nepozná viac ako 10 typov v genómu vírusu, ale aj pre lekársku prax dostatočne rozlíšiť niekoľko genotypov, ktoré majú najväčší podiel na oblasti. Určenie genetického typu zohráva kľúčovú úlohu pri výbere časového rozvrhu liečby, čo je veľmi potrebné, ak zoberieme do úvahy širokú škálu vedľajších účinkov liekov proti hepatitíde.

Metódy liečenia vírusovej hepatitídy C

Jediným efektívnym spôsobom, ako liečiť vírus hepatitídy, je spravidla kombinácia 2 liekov: interferón-alfa spolu s ribavirínom. Oddelene tieto lieky nie sú také účinné. Odporúčané dávkovanie liekov a načasovanie aplikácie by mali predpisovať len lekár a individuálne pre každého pacienta. Liečba týmto liekom môže trvať 6 až 12 mesiacov.

Dnes nie sú lieky vynájdené, ktoré zaručujú 100% obnovu vírusu. Avšak pri správne zvolenej liečbe môže liečenie pacientov dosiahnuť až 90% počtu prípadov.

Kvalitatívna analýza PCR pre hepatitídu C

Hepatitída je vážna choroba, ktorá má mnoho príčin vzniku. Jadrom jeho vývoja je priame alebo nepriame poškodenie pečene. Vzhľadom na jeho dôležitosť pre celý organizmus je možné iba odhadnúť, akú zlou je patológia. V tomto článku sa budeme podrobnejšie venovať charakteristikám kurzu a laboratórnej diagnostike hepatitídy C.

Príčinou tohto ochorenia je vírusové činidlo, ktoré sa týka patogénov obsahujúcich RNA. Má charakteristickú vlastnosť - schopnosť mutovať, čiže zmeniť štruktúru. Kvôli tejto infekcii uniká napadnutie imunitného systému a vo väčšine prípadov vedie k chronickému zápalu pečene.

Vzhľadom na existenciu rôznych podtypov vírusu by sa výber liekov mal vykonať s prihliadnutím na výsledky genotypizácie. Napriek dlhej štúdii o ochorení a zvláštnostiach štruktúry HCV nebolo možné vyvinúť špecifickú očkovaciu látku proti tejto chorobe.

Problémy s včasnou diagnózou sú v asymptomatickom priebehu hepatitídy, čo vedie k tomu, že človek sa pri fáze cirhózy obracia na lekára. Na zistenie nákazy v čase sú potrebné pravidelné fyzické vyšetrenia. Len laboratórne vyšetrenie krvi môže identifikovať HCV a zabrániť infekcii iných. Skutočnosť, že nosič infekcie už dlho nevie o patológii a pokračuje v prenosu vírusu zdravým ľuďom.

Trasy prenosu

Vírus sa vo väčšine prípadov šíri cez krv, pretože obsahuje najväčšiu koncentráciu patogénnych látok. Preto sa infekcia prenáša:

• s hemodialýzou;
• pri pichnutí ihlou;
• v priebehu boja, keď je koža zranená a dochádza k hemokontaktu;
• s transfúziou krvi (transfúzia krvi).

Pravdepodobnosť infekcie s dôvernou intímnosťou je zanedbateľná, pretože sperma a vaginálny výtok obsahujú malý počet patogénov. Riziko infekcie sa významne zvyšuje, ak je ohrozená celistvosť sliznice pohlavných orgánov. Toto sa pozoruje u agresívneho a análneho sexu.

Pokiaľ ide o vertikálny spôsob prenosu infekcie, vykonáva sa v procese práce. V období gravidity nemôže patogén preniknúť do placenty do embrya. Prirodzene sa patogénna látka prenáša na dieťa pri traume jeho pokožky, keď je pozorovaný kontakt s krvou matky.

Po preniknutí patogénu do zdravého organizmu začína syntéza protilátok, čo je ochrana proti infekcii a patrí do imunitných štruktúr. Sú zistené počas počiatočnej štúdie osoby pomocou ELISA.

Na potvrdenie diagnózy sa pacient podrobuje polymerázovej reťazovej reakcii. Ide o analýzu identifikácie genetického materiálu patogénneho činidla a stanovenie vírusovej záťaže.

Laboratórna diagnostika hepatitídy C

Laboratórna diagnostika začína enzýmovou imunotestou. Jeho hlavnou úlohou je odhaliť protilátky proti patogénu. Jeho účinnosť je takmer 95%. Vďaka tomuto výskumu v predklinickej fáze je možné identifikovať nosič vírusu a poslať ho na ďalšie vyšetrenie.

Kvalitatívna analýza ELISA indikuje prítomnosť alebo neprítomnosť imunoglobulínov v krvi pacienta. Jeho výsledok môže byť "pozitívny" alebo "negatívny". Po obdržaní prvého variantu odpovede osoba ide na ďalšiu skúšku - PCR. Jeho cena závisí od kvality reagencií a laboratória. Náklady na polymerázovú reťazovú reakciu môžu dosiahnuť 4 000 rubľov.

Vlastnosti PCR

Pri polymerázovej reťazovej reakcii umožňuje dokonca aj malé množstvo biologického materiálu odhadnúť vírusovú záťaž v krvi, tj vypočítať koncentráciu patogénov v jednom mililitroku tekutiny.

S nástupom PCR bola diagnóza hepatitídy omnoho jednoduchšia. Analýza umožňuje identifikovať HCV RNA, stanoviť stupeň infekčného procesu a infekčnosť nosiča vírusu.

Existuje niekoľko typov genetickej diagnostiky:

1. kvalitatívna analýza PCR pre hepatitídu C - potvrdzuje prítomnosť alebo neprítomnosť HCV v krvi vyšetrovaného:
2. kvantitatívne, vďaka čomu je možné vypočítať koncentráciu vírusov a stanoviť stupeň ochorenia. Výsledok je uvedený v IU / ml alebo v kópiách / ml (v závislosti od laboratória);
3. genotypizácia je potrebná na stanovenie genotypu HCV. To je potrebné pre presný výber liekov, ktoré budú v tomto prípade najúčinnejšie. Analýza nepriamo naznačuje závažnosť patologického procesu v pečeni. Takže s tretím genotypom patogénu sa najčastejšie pozoruje steatóza, ktorej vývojom je nahromadenie tuku v hepatocytoch (jeho bunkách). Okrem toho typ vírusu ovplyvňuje výsledok a trvanie terapeutického kurzu.

Kvalitatívna analýza PCR pre hepatitídu C

Prvým krokom v laboratóriu je štúdium biologického materiálu na prítomnosť HCV RNA. Je dôležité mať na pamäti, že kvalitatívna analýza hepatitídy C má určitú úroveň citlivosti, a preto nemôže vždy dať správnu odpoveď. V tomto prípade sa odporúča vykonať opakovanú laboratórnu diagnostiku s použitím iných činidiel.

Aby sa získali spoľahlivé výsledky, mal by sa použiť testovací systém s citlivosťou najmenej 50 IU / ml.

Výsledok diagnózy môže byť buď "pozitívny", alebo "negatívny". Ak sa patogén nenachádza v krvi, štúdia sa končí. Keď je vo vzorke detekovaná patogénna látka, vykoná sa kvantitatívny počet vírusového zaťaženia.

Falošná negatívna odpoveď sa dosiahne, ak je narušený technologický proces, napríklad aktívne komponenty, ktoré utláčajú konštrukciu kópií patogénu, vstupujú do prostredia. Preto nie je možné zobraziť skutočný obraz krvi, kvôli ktorému nie je diagnostikovaná ľudská infekcia.

Falošne pozitívny výsledok možno získať, ak bola zberná rúrka pre biologický materiál, ako aj prostredie pre štúdiu kontaminované. Okrem toho je takáto analýza reakcie možná so zmiešanou infekciou, keď je pečeň ovplyvnená niekoľkými vírusmi, napríklad hepatitída C a D.

Indikácie pre kvalitatívny výskum

Lekár môže pacientovi priradiť kvalitatívnu štúdiu na detekciu RNA vírusu hepatitídy C:

• keď dostane pozitívnu alebo pochybnú odpoveď enzýmovej imunoanalýzy;
• na overenie diagnózy;
• stanovenie vírusovej záťaže;
• staging štádia choroby;
• diagnostikovanie zmiešaných infekcií. Často hepatitída C postihuje pečeň súčasne s vírusom "D";
• stanovenie terapeutickej taktiky pri zohľadnení genotypu patogénu;
• hodnotenie dynamiky zmien na pozadí liečby antivírusovými liekmi.

Výhody polymerázovej reťazovej reakcie zahŕňajú:

1. vysokú citlivosť technológie, ktorá umožňuje zistenie faktu infekcie v predklinickej fáze;
2. identifikácia genetického materiálu patogénu a nie protilátky proti nemu;
3. možnosť vytvorenia podtypu patogénneho činidla;
4. vysoká rýchlosť diagnostiky, pretože nie je potrebné vysievať materiál na živné médium, ale stačí použiť špecifické testovacie systémy. Osoba dostane výsledok po 5 hodinách;
5. univerzálnosť. Analýza umožňuje identifikovať akýkoľvek genetický materiál (RNA, DNA). Z tohto dôvodu doktor dokáže potvrdiť hepatitídu C a iné choroby (B);
6. možnosť detekcie latentnej infekcie.

Kvantitatívny výskum

Pri štúdiu krvi s polymerázovou reťazovou reakciou je možné vypočítať počet patogénov vo fixnom objeme biologického materiálu. Indikátor je uvedený v IU / ml. Z dôvodu analýzy je možné stanoviť stupeň infekčnosti pacienta, stanoviť stupeň infekčného procesu a tiež zhodnotiť účinnosť farmakoterapie.

Na základe PCR odborník rozhodne, ktoré dávky liekov môžu blokovať šírenie patogénov. Okrem toho sa stanoví trvanie antivírusovej liečby a prognóza života. Je dôležité mať na pamäti, že testovacie systémy sú veľmi citlivé, takže metóda umožňuje potvrdiť infekciu človeka aj v predklinickej fáze.

genotypu

Vzhľadom na schopnosť príčinného činidla mutovať, určiť taktiku liečby a výber antivírusových liekov je potrebný jej genotyp. Napríklad liečba hepatitídy HCV 1 trvá 48 týždňov, pozitívny trend sa pozoroval iba v 60% prípadov. Genotypy 2 a 3 majú priaznivejšiu prognózu. Antivírusové lieky sú predpísané počas 8 mesiacov a ich účinnosť dosahuje 85%.

Podľa štatistických údajov sú vo väčšine prípadov registrované HCV 1, 2 a 3 na území Ruskej federácie.

Pri dešifrovaní laboratórnej štúdie možno takúto odpoveď uviesť - "nie je zadaná". To znamená, že vírus cirkuluje v obehovom systéme pacienta, ktorý testovací systém nemôže rozpoznať. Výsledok analýzy v tomto prípade naznačuje infekciu osoby atypickej pre danú zemepisnú oblasť pôvodcu.

Ako získať spoľahlivé výsledky?

Na kvalitatívny výskum PCR na detekciu RNA príčinného pôvodcu hepatitídy C preukázali správne výsledky, je potrebné splniť požiadavky na prípravu na laboratórnu diagnostiku:

1. odber vzoriek krvi sa vykonáva na prázdny žalúdok a "hladová" medzera by nemala byť kratšia ako 8 hodín;
2. dva dni pred štúdiom sa odporúča prerušiť konzumáciu alkoholu a odmietnuť ostré, tučné a údené jedlá;
3. zrušiť zavedenie liekov, ktoré znižujú zrážanlivosť krvi, ako napríklad heparín. Ak sú tieto lieky predpísané z dôvodu života, mali by ste o tom informovať lekára. Okrem toho by odborník mal vedieť o prijatí iných liekov, ktoré môžu mať vplyv na výsledok laboratórneho testu;
4. V predvečer zberu biologického materiálu by nemali byť vykonávané fyzioterapeutické postupy a vystavené ťažkej fyzickej námahe.

Výsledky analýzy môžu ovplyvniť nielen osoba, ktorá daruje krv, ale aj iné faktory, a to:

• zlá zber krvi;
• nedodržiavanie odporúčaní týkajúcich sa prepravy biologického materiálu;
• nedostatočná odborná príprava laboratórnych pracovníkov;
• nedodržiavanie výskumných techník;
• zavedenie antikoagulancií (heparínu) v predvečer odberu krvi. Táto skupina liekov znižuje zrážanlivosť, čím spomaľuje prácu činidiel.

V rôznych laboratóriách môže byť diagnostická odpoveď mierne odlišná, ale tieto chyby neovplyvňujú konečný výsledok štúdie.

Osobitná pozornosť sa venuje typom testovacích systémov, ktoré sa používajú v laboratóriu. Často sa uprednostňujú reaktanty s vysokou citlivosťou. To je dôležité pre pacientov s nízkou vírusovou záťažou, pretože je ťažké ich zistiť.

Ako často sa vykonáva laboratórna skúška?

Primárne sa polymerázová reťazová reakcia uskutočňuje u ľudí, ktorí boli testovaní na protilátky proti vírusu hepatitídy v imunoteste. V tomto prípade je určený na potvrdenie skutočnosti infekcie osoby a stanovenie štádia choroby. Analýza navyše umožňuje určiť podtyp vírusu, ktorý je obzvlášť dôležitý pri výbere liekov.

Ďalšie obdobie povinného laboratórneho testovania je 3 mesiace od začiatku antivírusovej liečby. Diagnóza poskytuje možnosť zhodnotiť účinnosť liekov, upraviť dávku alebo ju nahradiť.

Okrem základných analýz sa PCR môže vykonať dodatočne v priebehu 4 a 24 týždňov od začiatku liečby. Pozitívna prognóza ochorenia je potvrdená znížením vírusovej záťaže po troch mesiacoch liečby. Napríklad by sa mala znížiť z 1 milióna IU / ml na niekoľko sto tisíc.

Ak koncentrácia patogénnych látok v krvi zostane na rovnakej úrovni alebo mierne stúpa, znamená to neúčinnosť antivírusových látok a vyžaduje ich výmenu. Pomocou PCR na konci liečby je možné potvrdiť zotavenie pacienta.

Na správnu interpretáciu výsledkov laboratórnej diagnózy je potrebná konzultácia s odborníkom na hepatológiu alebo špecialistu na infekčnú chorobu. Vzhľadom na vysoký výskyt falošných odpovedí na test ELISA sa analýza používa výhradne na primárne vyšetrenie. Na dôkladnejšie vyšetrenie pacienta sa používa polymerázová reťazová reakcia.

Ako sa zotaviť z hepatitídy C s 97% pravdepodobnosťou?

Dnes, moderné lieky a nové generácie sofosbuvir Daklatasvir s 97-100% pravdepodobnosťou navždy ťa uzdraví z hepatitídy C. Najnovším liek je k dispozícii v ruštine na oficiálnej predstaviteľ indického farmgiganta ZYDUS Heptiza. Objednaný tovar dodá kuriér do 4 dní, platba po prevzatí. Získajte bezplatnú konzultáciu o používaní moderných liekov, ako aj informácie o spôsoboch nákupu, ktoré môžete získať na oficiálnej webovej stránke dodávateľa Zydus v Rusku.

Rnk nenašiel, čo to znamená

"Detekcia génov vírusu hepatitídy C (HVC) v krvi pacienta je druhou etapou laboratórnej diagnostiky tejto infekčnej patológie. Na detekciu činidla, ktoré nemá bunkovú membránu a teda povrchové antigény, sa používa metóda polymerázovej reťazovej reakcie. Pomocou tejto metódy je to priamo molekula, v ktorej sú všetky jeho genetické informácie zakódované - RNA.

RNA - Ribonukleová kyselina spolu s DNA je súčasťou buniek všetkých živých organizmov. Vírus hepatitídy C obsahuje molekulu RNA a má schopnosť mutovať ju.

Štúdia na prítomnosť genómu HVC sa zvyčajne podáva po vykonaní všeobecného biochemického krvného testu a získa sa pozitívna protilátková odpoveď (anti-HVC).

Čo to znamená?

Výskum na protilátky proti HVC je premietanie, to znamená, že môže byť použitá pre skúmať veľké množstvo ľudí (lekári, tehotné ženy, nemocničných pacientov, darcov, injekčné užívatelia drog, HIV-pozitívne). Negatívny výsledok laboratórnej analýzy anti-HVC naznačuje, že nedošlo k žiadnej imunitnej odpovedi na vírus v krvi subjektu. V týchto prípadoch možno získať negatívny výsledok:

Ak osoba nebola nikdy infikovaná hepatitídou C.

Ak je citlivosť laboratórneho testovacieho systému nižšia ako koncentrácia anti-HVC.

Ak sa infekcia vyskytla menej ako pred 2 mesiacmi a anti-HVC v krvi stále nestačí na určenie. S falošne negatívnou odpoveďou v dôsledku ľudského faktora.

Ak sa získa výsledok, že protilátky proti HVC u pacienta detekovaná, to znamená, že sa vírus hepatitídy C je v tele subjektu v čase prieskumu alebo mal krv pred časom. Ak pozitívny výsledok pre anti-HVC existuje potreba ďalších laboratórnymi testami, ktoré detekujú genetický materiál patogénu, sa stanoví koncentrácia svojich génov (vírusová záťaž, virémia) a stanoviť genotyp.

Analýza RNA vírusu hepatitídy C

Genóm HVC v laboratóriu možno zistiť pomocou niekoľkých štúdií:

rozvetvená DNA (p-DNA);

transkripčná amplifikácia (TMA);

polymerázová reťazová reakcia (PCR).

Metóda p-DNA je lacný a jednoduchý spôsob detekcie vírusového genómu u veľkého počtu sledovaných ľudí. Jeho hlavnou nevýhodou je nízka citlivosť: detekuje HVC len pri koncentrácii nad 500 IU / ml.

Metóda transkripčnej amplifikácie deteguje nukleové kyseliny vírusu v krvnom sére. Analýza má vysokú citlivosť (5-10 IU / ml), ale ešte sa dostatočne nevyskytla do všadeprítomnej laboratórnej praxe.

Metóda PCR v Rusku je najbežnejším a cenovo dostupným laboratórnym vyšetrením s vysokou citlivosťou (od 50 do 60 IU / ml).

Test PCR sa vykonáva v akomkoľvek klinickom laboratóriu, ktoré má príslušnú akreditáciu. Veľmi dôležitou nuansou tejto diagnostickej metódy, ktorá ovplyvňuje výsledok analýzy, je citlivosť skúšobného systému používaného v laboratóriu. Napríklad citlivosť diagnostiky 60 IU / ml, ako v laboratóriách Invitro, umožňuje detegovať vírusovú RNA 3 mesiace po infekcii. Pri nízkej citlivosti testovacieho systému nemôžu byť gény patogénu detegované ani po 4 mesiacoch po infekcii.

RNA vírusu hepatitídy C: metóda PCR

Metóda PCR má mnoho výhod oproti iným laboratórnym testom na detekciu génov HVC:

vysoká citlivosť. Metóda umožňuje určiť genetický materiál patogénu aj pri jeho minimálnej koncentrácii vo vzorke;

väčšia špecifičnosť. Identifikuje gény vírusu špecifického genotypu medzi rôznymi DNA a RNA iných patogénov, čo umožňuje genotypizáciu patogénu;

vykonávanie rýchlosti. Absencia dlhého procesu kultivácie patogénu znižuje čas dosiahnutia výsledku až na niekoľko hodín; univerzálnosť analýzy.

Univerzálny postup pre štúdium umožňuje súčasné použitie jednej vzorky ľudskej krvi na detekciu genetického materiálu rôznych patogénov. Tieto výhody umožňujú považovať PCR za "zlatý štandard" laboratórnej diagnostiky vírusovej hepatitídy C spolu s enzýmovým imunologickým testom na anti-HVC.

PCR je štúdia používaná na stanovenie génov HVC v krvi vyšetrovanej osoby. Štúdia pozostáva z niekoľkých etáp:

Odber vzoriek z biomateriálu.

Zvýšte nárast koncentrácie kópií RNA vo vybranej vzorke.

Detekcia genetického materiálu pomocou špeciálnych testovacích systémov.

Po odobratí žilovej krvi pacient podstúpil umelé iniciovanie procesu opakovanej replikácie (amplifikácie, kopírovania) génov HVC.

Na tento účel sa teplota vo vnútri skúmavky s biologickým materiálom niekoľkokrát mení určitým spôsobom. Keď počet kópií RNA v skúmavke dosiahne požadovanú hodnotu, deteguje sa patogén pomocou špeciálnych diagnostických testov.

kvalita (deteguje prítomnosť vírusu),

kvantitatívna (určuje koncentráciu vírusových génov na jednotku objemu)

genotypický (stanovuje genotyp patogénu).

RNA hepatitídy C: kvalitatívna analýza

Úlohou kvalitatívnej PCR je určiť prítomnosť HVC v prezentovanom biomateriále. Táto štúdia sa zvyčajne vykonáva na skríning diagnostiky ochorenia alebo identifikáciu nosiča. Priraďte ho po tom, ako ho deteguje anti-HVC pomocou testu ELISA.

Na diagnostikovanie hepatitídy C stačí dostatočne zistiť HCV genetický materiál kvalitatívne, to znamená bez počítania jeho koncentrácie v krvnom objeme. Výsledok kvalitatívnej PCR môže byť: "detegovaná RNA" alebo "RNA nezistená".

Presnosť metódy zodpovedá 95%. Súčasne presnosť testovacích diagnostik sami dosiahne 100% a 5% je ľudský faktor, ktorý je vždy prítomný v laboratórnych štúdiách. Aby sa zabránilo falošne negatívnej analýze, najmä u ľudí s nízkou viremiou, je potrebná vysoká citlivosť diagnostického systému použitého v štúdii. Citlivosť testovacieho systému by nemala byť nižšia ako 60 IU / ml.

RNA hepatitídy C: kvantitatívna analýza

Kvantitatívna analýza je predpísaná, ak je potrebné poznať úroveň virémie v ľudskom tele. Indikácie pre túto štúdiu sú:

pozitívny výsledok kvalitatívnej PCR za predpokladu, že sú detegované protilátky proti vírusu;

stanovenie štádia patológie;

definícia vírusovej záťaže pri hepatitíde;

výber kombinácie antivírusových liekov;

Monitorovanie vírusovej odpovede na prebiehajúcu antivírusovú liečbu;

hodnotenie pravdepodobnosti prechodu akútnej hepatitídy C na chronickú.

Výsledok analýzy je vyjadrený v IU / ml (medzinárodné jednotky v 1 ml séra) alebo v kópiách / ml (počet kópií vírusových génov v 1 ml séra). Kvantitatívna PCR nemá normu: normálne by nemal byť detegovaný gén HVC v ľudskej krvi. Výsledky prieskumu sa porovnávajú s referenčnými hodnotami stanovenými pre daný stupeň vírusovej záťaže.

Takže indikátory (v IU / ml):

menej ako 4 × 10 * 5 sa považujú za nízku virémiu;

od 4 × 10 * 5 do 8 × 10 * 5 - stredné;

viac ako 8 × 10 * 5 - vysoká.

Čím viac kópií vírusovej RNA v krvi, tým agresívnejšia je choroba a tým väčšie je riziko prenosu vírusu na iné. Avšak úroveň vírusovej záťaže nie je jediným indikátorom, ktorý ovplyvňuje závažnosť priebehu patológie a ďalšiu prognózu pre pacienta: je tiež dôležitý genotyp patogénu.

Vytvorenie genotypu je nevyhnutné pre určenie správneho liečebného režimu. Určuje aj prognózu pre zdravie a život pacienta. Napríklad vírus 3 genotypu často vedie k fibróze alebo cirhóze pečene v porovnaní s pacientmi nesúcimi 1 genotyp.

Hepatitída C: analýza a interpretácia

RNA Diagnóza hepatitídy C sa nemôže robiť len na základe kvalitatívnej a / alebo kvantitatívnej PCR: stanovenie HVC a úroveň vírusovej záťaže nestačí na predpísanie adekvátnej antivírusovej liečby. Potenciálny pacient musí byť podrobne vyšetrený (klinicky, laboratórne, inštrumentálne), aby mal objektívny obraz o patológii. Správne vymenovať komplex vyšetrení na stanovenie diagnózy hepatitídy C a potom správne dešifrovať výsledky môžu len lekára.

hepatitída s RNA nie je detegovaná

Populárne články na tému: hepatitída s RNA nie je zistená

Chronická vírusová hepatitída je skupina infekčných chorôb, ktoré sa šíria po celom svete alarmujúcou rýchlosťou.

História štúdie vírusovej hepatitídy (SH), začína v roku 1965, kedy B. Blumberg so štúdiom v krvnom sére austrálskeho Aboridžinec objavenej antigén, tvoriaci čiaru zrážok v reakcii so sérom pacienta s hemofíliou.

Autoimunitné hepatitída (AIH) - nekrotické chronické zápalové ochorenie pečene neznámej etiológie, vyznačujúci sa tým, periportálna alebo rozsiahlejšie zápalu pečene, hypergammaglobulinemia a prítomnosť príchodom široký.

Na Ukrajine sa vírusová hepatitída A môže oprávnene nazývať detskou infekciou.

Tactika riadenia pacientov s infekciou vírusom hepatitídy C. Klinické odporúčania Európskej asociácie pre štúdium ochorení pečene (EASL) 2015.

Tactika riadenia pacientov s infekciou vírusom hepatitídy C. Klinické odporúčania Európskej asociácie pre štúdium ochorení pečene (EASL) 2015.

Tactika riadenia pacientov s infekciou vírusom hepatitídy C. Klinické odporúčania Európskej asociácie pre štúdium ochorení pečene (EASL) 2015.

Tactika riadenia pacientov s infekciou vírusom hepatitídy C. Klinické odporúčania Európskej asociácie pre štúdium ochorení pečene (EASL) 2015.

V súčasnosti má Ukrajina mimoriadne znepokojujúcu situáciu v súvislosti s infekciou HIV. V roku 2005 bola v našej krajine oficiálna miera infekcie HIV 29,4 prípadov na 100 000 obyvateľov.

Diagnóza vírusu hepatitídy C

Vírus hepatitídy C (HCV) je vírus obsahujúci RNA z rodiny Flaviviridae. Táto infekcia je schopná reprodukovať v krvných bunkách (monocyty, neutrofily, B lymfocyty a makrofágy) a tiež poškodiť bunky pečene samotné - hepatocyty. Vzhľadom na vysoký stupeň mutácie je tento typ hepatitídy schopný vyhnúť sa vplyvu ľudského imunitného systému.

Existuje 11 genotypov a množstvo podtypov takéhoto vírusu, ktoré sa líšia v stupni poškodenia pečene a ovplyvňujú načasovanie liečby hepatitídou. Takáto paleta hepatitídy C vyžaduje rôzne metódy antivírusovej liečby. Napríklad hepatitída prvého a štvrtého genotypu sa má liečiť 48 týždňov a pre liečbu proti vírusom 2. a 3. druhu môže trvať iba 24 týždňov.

Po rýchlom teste na hepatitídu C sa dosiahol pozitívny výsledok, vykonala sa analýza PCR na identifikáciu RNA vírusu v krvných vzorkách.

PCR diagnostika

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) je experimentálna technika na detekciu vírusov. Takáto analýza pre hepatitídu C umožňuje významné zvýšenie koncentrácie niektorých fragmentov vírusu DNA alebo RNA v predložených vzorkách. To umožňuje rozpoznať ich a dokonca aj započítať číslo.

Tento test na hepatitídu C sa uskutočňuje podľa nasledujúceho postupu:

1. Vzorka krvi (genetický materiál), ktorá môže obsahovať požadovaný gén pre hepatitídu, sa zavedie do skúmavky. Na svoje miesto špeciálne látky - priméry, sú segmenty krátkej dĺžky od požadovaného génu, ktoré sú syntetizované chemicky. V tejto nádobe je tiež pridaná DNA alebo RNA polymeráza, je schopná vytvoriť reťazce nukleovej kyseliny úplne identické s pôvodnou. K získanému zloženiu je pridaný výber voľných nukleotidov, ktoré sú špeciálnym stavebným materiálom pre DNA a RNA, z ktorých jedna obsahuje malé častice rádioaktívneho fosforu.
2. Výsledná zmes sa najprv zohreje na 95 stupňov, v dôsledku čoho sa prekladá v normálnom stave, a preto sú obe špirály DNA oslabené kvôli tomuto účinku.
3. Na pokračovanie analýzy sa liečivo ochladzuje, v tomto bode sú priméry pripojené k požadovanej oblasti genómu vírusu hepatitídy a neumožňujú tvorbe DNA do dvojitej helixy. Keď sa zmes ochladí, polymeráza vyhľadáva jednotlivé vlákna nukleotidov. Počas pripojenia tohto enzýmu kĺže pozdĺž reťazca DNA (ako blok pomocou lana) a na dvojitej špirále nie je schopný "pracovať", na tento účel sa zmes zahrieva.
4. Na predĺženie analýzy sa uskutočňuje opätovné zahrievanie, čo opäť vedie k oddeleniu nukleotidových reťazcov. Pri vykonávaní takýchto cyklov PCR vo vzorke o neznámom množstve zvyšuje hepatitídy génov v geometrických pomeroch a iných genetických materiálov vyrobených (vytvorené) v lineárnom modeli.
5. Na dokončenie štúdie sa roztok purifikuje z reziduálnych nukleotidových častíc. Oddeľujú sa elektroforézou s oddelením molekulových reťazcov DNA parametrami molekulovej hmotnosti. Takéto testy na hepatitídu pomocou PCR umožňujú určiť, či sú požadované gény vírusu prítomné v testovanej vzorke, alebo nie.

Výhodou tohto testu je veľmi vysoký prah citlivosti PCR reakcie. Takáto technika na vykonávanie diagnostiky v ideálnom prípade vyžaduje iba jeden genóm vírusu pre celú vzorku.

Okrem toho je takáto PCR úplne špecifická. V každom z génov existuje jedinečná sekvencia nukleotidov, ktorá sa podobne ako odtlačok prsta nemôže nikam opakovať. Pri tejto analýze hepatitídy C sa priméry syntetizujú takým spôsobom, že úplne zodpovedajú jedinečným častiam požadovaných génov, ktoré nemajú žiadna iná sekvencia.

Táto technika tiež umožňuje analyzovať a zistiť hepatitídu v c, čo pomáha stanoviť definitívnu diagnózu.

Takáto laboratórna analýza umožňuje získať informácie viac ako len prítomnosť alebo neprítomnosť HCV RNA alebo iného typu v krvných vzorkách. Definovaním parametra rádioaktívneho žiarenia je tiež možnosť zistiť, koľko sa pôvodne našiel požadovaný genetický materiál vo vzorke. To nám umožňuje určiť parameter takzvaného vírusového zaťaženia - koncentrácie častíc hepatitídy RNA v určitom objeme.

Kvalitatívna analýza PCR

Táto analýza umožňuje určiť prítomnosť vírusu hepatitídy v krvných vzorkách. Musí sa urobiť pre všetkých ľudí, u ktorých sa zistilo, že majú protilátky proti hepatitíde.

Výsledkom takejto štúdie môžu byť iba dve hodnoty:

• "Našiel som". Takýto pozitívny výsledok testu sa interpretuje nasledovne: v analyzovanej vzorke z biologického materiálu sa našli fragmenty RNA vírusu hepatitídy. Z toho vyplýva, že došlo k infekcii pacienta týmto vírusom. To môže naznačovať, že pôvodca hepatitídy sa v tele rozmnožuje a infikuje nové bunky a zničí pečeň.
• "Nezistil sa". Tento výsledok ukazuje, že vo vzorke, ktorý je analyzovaný v laboratóriu bolo zistené, že fragmenty RNA, ktorá je špecifická pre vírus hepatitídy C Existuje aj možnosť, že sa koncentrácia RNA vírusu-patogénu vo vzorke bol tak malý, že test nebol schopný identifikovať, V takýchto prípadoch sa hovorí, že úroveň koncentrácie je pod hranicou citlivosti testu.

Takýto test môže byť tiež falošne pozitívne alebo negatívne z dôvodu kontaminácie biologického materiálu alebo prítomnosť špecifických látok vo vzorkách, reagujúce s chemickými zložkami potrebnými pre analýzu.

Je potrebné zdôrazniť, že v akútnych fázach hepatitídy C môže kvalitatívna štúdia používajúca PCR metódu odhaliť svoju RNA len 1-2 týždne od okamihu infekcie tela. To znamená, že ochorenie môže byť identifikované dlho pred objavením sa vonkajších príznakov alebo výskytom protilátok proti hepatitíde v tele.

Odber vzoriek krvi (z žily) sa s výhodou vykonáva na prázdny žalúdok.

Kvantitatívna analýza PCR

Pomocou tejto analýzy určite úroveň koncentrácie vírusu hepatitídy u pacienta (vírusová záťaž). Takýto test musí byť predložený s cieľom odhadnúť množstvo RNA vírusu v jednotke určitého objemu.

Analýza testov na hepatitídu c, vykonávaná pomocou tejto techniky, môže mať tieto výsledky:

• Kvantitatívny ukazovateľ (v číslach)

Koncentrácia vírusu (číslo) sa uvádza číselne. Na tento účel sa používajú rôzne jednotky: buď ME / ml (medzinárodná jednotka na mililiter) alebo kópie / ml (počet kópií vírusu RNA v mililitroch). V priemere 1 IU / ml zodpovedá 4 kópiám / ml, pretože rôzne testovacie systémy majú pre takéto jednotky rôzne konverzné faktory.

Nízke vírusové zaťaženie sa pre tento test považuje za menej ako 400 000 IU / ml a vysoké je 8000000 IU / ml.

Toto kvantitatívne hodnotenie umožňuje určiť úroveň infekčnosti choroby ("infekčnosť") pacienta. Čím viac tento ukazovateľ analýzy, tým vyššie je riziko prenosu patogénu na iné osoby (s pohlavným stykom alebo vertikálnou cestou).

Tento verdikt znamená, že kvantitatívna metóda nedokázala zistiť hepatitídu RNA, ale samotný vírus je prítomný v tele len vo veľmi nízkej koncentrácii. Toto potvrdilo vykonanie dodatočnej kvalitatívnej analýzy PCR a jeho pozitívny výsledok naznačuje prítomnosť hepatitídy.

Kvantitatívna analýza PCR vykonávaná v rôznych fázach antivírusovej terapii (1., 4., 12. a 24. týždňov) poskytuje údaje o účinnosti liečby a vykonať potrebné opravy.

Špecifickosť analýzy

Tento test musí byť predložený na určenie rôznych genotypov hepatitídy C. V súčasnosti je známym 11 genotypov tohto patogénu a mnoho subtypov. Genotypy hepatitídy typu C 1., 2. a 3. druhu sú bežné v našej krajine. V laboratóriách môže detekovať rôzne subtypov týchto druhov: 1a, 1b, 2a, 2b, alebo 3, 4, 5, 6 genotypov s rôznymi modifikáciami podtypy. Pri všetkých týchto hepatitídách je špecifickosť detekcie 100%.

Objasnenie modifikácie genotypu umožňuje zvoliť vhodnú liečbu. Prítomnosť určitého typu genotypu u pacienta neznamená, že choroba je jednoduchšia alebo zložitejšia, sú to len odrody vírusu hepatitídy a nie viac.

V tých prípadoch, keď laboratórium nedokáže izolovať genotyp vírusu, môže byť výsledok vydaný: "Nie je zadaný. Boli študované genotypy: také a také (napríklad la, 2b, 3av). Tento prepis naznačuje, že v tomto laboratóriu neboli žiadne zodpovedajúce činidlá, ktoré by mohli určiť genotyp vírusu hepatitídy. V štúdii bola vykonaná kontrola vírusov uvedených v zozname, ale ich korešpondencia s vzorkami RNA nebola zistená.

Na vykonanie konečnej diagnózy je len jeden druh analýzy nedostatočný. Každý z testov môže poskytnúť falošne pozitívny výsledok. Vykonáva sa zložitá štúdia na určenie presného typu hepatitídy a stupňa infekcie touto infekciou tela. Súčasne sa robia biopsia pečene a testovanie jeho enzýmov: ALAT, ASAT, ako aj alkalická fosfatáza a LDH. Môže sa tiež vykonať bilirubínový test a analýza protrombínového indexu.

Len komplex takýchto testov a laboratórnych testov s všeobecnou analýzou stavu pacienta pomôže určiť prítomnosť hepatitídy v tele, jej tvar a tiež stupeň závažnosti. Na ich základe lekár môže určiť ďalšiu liečbu a urobiť pre pacienta možnú prognózu.