Použitie diagnostiky PCR

Share Tweet Pin it

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) v molekulárnej biológii sa nazýva experimentálna metóda detekcie vírusov. Umožňuje významne zvýšiť koncentráciu určitých fragmentov nukleovej kyseliny (DNA) vo vzorkách biologického materiálu, čo umožňuje určiť (rozpoznať) a spočítať ich.

Analýza sa uskutočňuje nasledovne. Genetický materiál (vzorka krvi), ktorý potenciálne môže obsahovať požadovaný gén, sa zavedie do skúmavky. Aj tam sú umiestnené priméry - chemicky syntetizované malé dĺžky požadovaného génu.

Do nádoby sa tiež pridá DNA alebo RNA polymeráza, je schopná vytvoriť reťazec nukleovej kyseliny, ktorý je úplne identický s pôvodným reťazcom. Súbor štyroch voľných nukleotidov, špeciálny stavebný materiál pre RNA alebo DNA, z ktorých jedna obsahuje rádioaktívne častice fosforu, sa tiež zavádza do výslednej kompozície.

Výsledná zmes sa zahreje na 95 až 96 ° C, kvôli ktorému sa rozdelia obidve DNA helixy, ktoré sa previažu v bežnom stave. Potom sa prípravok ochladí, v tomto čase sa priméry pripojí k požadovanej oblasti vírusového genómu, bez toho, aby RNA (alebo DNA) opäť vytvorila dvojitú špirálu.

Počas chladenia polymeráza vyhľadáva voľný reťazec nukleotidov. Pre fungovanie tohto enzýmu je potrebný jeden reťazec nukleotidov. Pretože polymeráza klesá pozdĺž reťazca DNA (ako krúžok lano), nemôže fungovať na dvojitej špirále.

Potom sa uskutočňuje opakovaný cyklus zahrievania, kvôli ktorému sú nukleotidové reťazce oddelené. Pri každom z týchto cyklov PCR sa množstvo požadovaného génu pre hepatitídu vo vzorke zvyšuje v geometrickej progresii a zvyšok genetického materiálu sa produkuje lineárne.

Po purifikácii roztoku nukleotidových zvyškov a oddelení reťazcov DNA parametrom molekulovej hmotnosti od elektroforézy je ľahké určiť, či požadovaný gén existuje v testovanej vzorke alebo nie.

Výhody PCR

Laboratórna štúdia používajúca metódu PCR umožňuje získať ešte viac informácií ako len prítomnosť RNA vírusu. Pri určovaní parametra úrovne rádioaktívneho žiarenia je možné určiť, aké množstvo genetického materiálu bolo na začiatku obsiahnuté v skúmanej vzorke. V prípade hepatitídy určte úroveň vírusovej záťaže.

Ďalšou výhodou tejto metódy je veľmi vysoká citlivosť CR reakcie. Je oveľa vyššia ako klasické metódy na detekciu vírusov. V ideálnom prípade, aby sa identifikoval požadovaný gén, stačí iba jeden vírus vo vzorke na PCR.

Okrem toho je PCR úplne špecifická. Jeho priméry sú vytvorené tak, aby úplne zodpovedali jedinečným častiam požadovaných génov, ktoré žiadna iná sekvencia nemá. Oba odtlačky prstov sú jedinečné a v každom géne existujú jedinečné sekvencie nukleotidov.

Kvalitatívna analýza PCR

Kvalitatívna analýza odhaľuje iba prítomnosť vírusu v krvi. Tento test sa má vykonať u všetkých pacientov, u ktorých sa zistilo, že majú v krvi protilátky na hepatitídu C. Výsledok môže byť len jedna z dvoch hodnôt: "zistená" alebo "nezistená". U zdravého človeka by norma (referenčná hodnota) mala byť "nezistená".

Existuje aj špeciálna interpretácia takýchto výsledkov uskutočneného kvalitatívneho výskumu:

  • Výsledok je "objavený". To znamená, že vo vzorke biologického materiálu, s ktorým bolo nájdené RNA fragmentu, ktorý je špecifický pre vírusu hepatitídy C V dôsledku toho je skutočnosť, že u pacienta s infekciu vírusom hepatitídy B s C-je výsledok kvalitatívnej PCR je "objavil", znamená to, že vírus opakovanie a v tomto čase infikuje nové pečeňové bunky v tele.
  • Výsledok je "nezistil". Takéto rozhodnutie ukazuje, že vo vzorke biologického materiálu získaný fragment RNA nie je v laboratóriu, ktorá je špecifická pre HCV RNA buď rovnakej koncentrácii patogénu infekcie vo vzorke bola pod hranicou citlivosti testu detekovaný.

V akútnej fáze RNA vírusu hepatitídy C sa môžu kvalitatívne štúdie s použitím PCR techniky odhaliť po 1-2 týždňoch bezprostredne po infekcii tela, tj dlho pred vznikom protilátok proti samotnej hepatitíde.

Nespoľahlivé výsledky analýz takéhoto vyšetrovania je možné získať s:

  • kontaminovaný biomateriál;
  • prítomnosť heparínu v krvi pacienta;
  • prítomnosť vo vzorke chemických alebo bielkovinových látok (inhibítorov), ktoré ovplyvňujú rôzne zložky PCR.

Pre kvalitatívnu analýzu PCR nie je potrebná špeciálna príprava pacienta na štúdium. Venózna krv sa používa ako materiál.

Hodnotenie výsledkov

Kvalitatívne PCR testy majú určitý stupeň citlivosti a v závislosti od presnosti výskumu a úroveň vybavenia v laboratóriu môže kolísať medzi 10 a 500 IU / ml.

To znamená, že ak je vírus vo vzorke krvi prítomný vo veľmi nízkej koncentrácii (menej ako prahová citlivosť daného laboratória), pacienta pacienta sa môže zistiť ako "nezistené". Z tohto dôvodu, pri vykonávaní kvalitatívnu analýzu PCR s nízkou úrovňou virémie (vírus nízka koncentrácia), napríklad u pacientov, ktorí podstúpili liečbu antivírusovej terapie, je dôležité poznať, a prah citlivosti diagnostického systému.

Varianty diagnostických systémov

Na kontrolu virologickej odpovede sa odporúča používať antivírusovú liečbu na použitie diagnostických systémov s prahom citlivosti najmenej 50 IU / ml. Tieto kritériá sú splnené, napríklad: analyzátory COBAS Ampicolor HCV test (c presnosť 50 IU / ml) a RealBest HCV RNA (s citlivosťou 15 IU / ml).

Podľa odporúčaní WHO pre vytvorenie konečnej diagnóze hepatitídy C, musí byť založené iba na základe trojitého detekcie RNA vírusu vo vzorkách séra od pacienta so žiadnymi inými druhmi hepatitídy markeru.

Okrem metód PCR sa na odhaľovanie HCV RNA u pacientov používa štúdia TMA (metóda transkripčnej amplifikácie). Má najvyššiu hranicu citlivosti (5-10 IU / ml), ale v našej krajine táto metóda testovania ešte nie je veľmi obvyklá.

Rozsah zistených zmien vírusov

Toto kvalitatívne stanovenie prítomnosti RNA vírusu hepatitídy C v sére umožňuje určiť niekoľko genotypov tohto vírusu. V súčasnej dobe veda vie viac ako šesť genotypov tohto vírusu, rovnako ako asi 10 subtypov choroby.

Vírusy s 1, 2, 3 genotypmi sú v našej krajine bežné. Laboratóriá môžu identifikovať nasledujúce genotypy: 1a a 1b, 2a, 2b a 2c, a 3, 4, 5a a 6 bez ohľadu na podtypy. Pri všetkých vírusových modifikáciách je špecifickosť detekcie 100%.

Kvantitatívna analýza PCR

Pomocou kvantitatívneho PCR testu sa určí koncentrácia vírusu hepatitídy v krvných vzorkách (vírusová záťaž). Tento test virémie (koncentrácia vírusu) vám umožňuje určiť počet jednotiek špecifického genetického materiálu (najviac vírusovej RNA), ktorý sa deteguje v určitej miere. V tomto prípade určte jeho koncentráciu v 1 ml, čo zodpovedá 1 cu. cm.

Kvantitatívne parametre analýzy sú vyjadrené v číslach pre toto použitie ako jednotky merania medzinárodných jednotiek (IU) na mililiter (ml), označené ako ME / ml. Teraz v niektorých laboratóriách možno množstvo vírusu stanoviť v iných jednotkách: počet kópií na ml je označený ako kópie / ml.

  • Načasovanie: pre hepatitídu C sa takáto kvantitatívna analýza PCR vykonáva tesne pred začiatkom liečby. Potom na 1., 4., 12. a 24. týždni. Hodnotenie v 12. týždni je orientačné, umožňuje určiť účinnosť terapie.
  • Príprava na analýzu. Pri kvantitatívnej analýze PCR sa nevyžaduje špeciálna príprava pacienta na štúdium. Polhodinu pred odberom vzoriek by ste nemali fajčiť. Venózna krv sa používa ako laboratórny materiál.

Hodnotenie výsledkov

V prípade rôznych laboratórnych testovacích systémov existujú pre tento ukazovateľ rôzne konverzné faktory v IU / ml. V priemere sa používa konverzný parameter, v ktorom sú 4 kópie / ml = 1 IU / ml. To znamená, že ak laboratórium dáva výsledok PCR analýzy 2,4 * 10 6 kópií / ml, potom by tento parameter mal byť rozdelený na 4 a dostaneme 6 x 105 5 IU / ml.

Úroveň vysokého zaťaženia 800 000 IU / ml sa považuje za vysokú, čo je približne ekvivalentný indexu 3 000 000 kópií / ml. Nízka virémia podľa niektorých autorov zodpovedá parametrom kvantitatívnej PCR pod 400 000 IU / ml.

V dôsledku kvantitatívneho testu sa konečné výsledky dajú dodať nie vo forme digitálnej hodnoty, ale: "pod meracím rozsahom" alebo "nezistené".

  • Vyhodnotenie: "pod meracím rozsahom". To naznačuje, že kvantitatívny test nezaznamenal vírusovú RNA vírusu hepatitídy C, ale samotný vírus je v tele prítomný vo veľmi malých koncentráciách. Toto je indikované dodatočným kvalitatívnym testom, ktorý potvrdzuje prítomnosť vírusu.
  • Hodnotenie: "nezistené". Tento výsledok naznačuje, že kvantitatívny test nezistil vírus vo vzorke RNA.

Parameter vírusovej záťaže určuje najprv stupeň infekčnosti choroby, úroveň "infekčnosti" pacienta. Čím vyššia je koncentrácia vírusu pacienta, tým väčšia je pravdepodobnosť jeho prenosu na iné osoby. Napríklad, ak máte sex s chorým človekom, alebo vertikálna cesta. Takýto kvantitatívny indikátor tiež pomáha určiť účinnosť liečby pacienta.

Vykonávanie kvantitatívnej analýzy PCC je dôležité pre antivírusovú liečbu, hodnotenie jej úspechu a plánovanie trvania kurzu. Takže s rýchlou odpoveďou tela na liečbu a nízkym stupňom virémie sa dĺžka liečby môže znížiť.

Pri pomalom znižovaní kvantitatívneho parametra PCR by sa antivírusová liečba mala rozšíriť alebo upraviť. Ak je úroveň vírusovej záťaže nízka, potom je to priaznivý faktor liečby, ak je vysoká, potom je aplikovaná metóda liečby neúčinná a lieky alebo spôsoby ich použitia by sa mali zmeniť.

Kvalitatívna analýza hepatitídy C

Nechajte odpoveď

Kvalitatívna analýza polymerázovej reťazovej reakcie - PCR pre hepatitídu C určuje prítomnosť alebo neprítomnosť HCV v tele. V laboratóriu sa študuje štruktúra RNA, v ktorej sa nachádza vírus. Ak je detegovaný vírus C, je potrebné podstúpiť liečbu, pretože zanedbané pečeňové ochorenie má vážne dôsledky. Kvalitačná PCR sa vykoná po zotavení na potvrdenie neprítomnosti protilátok. Určené a pre preventívne vyšetrenie. Pri nízkej koncentrácii patogénu v krvi nedokáže PCR (kvalitatívna) nič zistiť, pretože diagnostický systém má svoje prahové hodnoty citlivosti. V prípade počiatočného štádia ochorenia alebo miernej formy je PCR nakoniec diagnostikovaná s ultrasenzitívnym zariadením.

Čo je RNA vírus?

Termín RNA vírusu hepatitídy C (alebo RNA vírusu hepatitídy C) sa nazýva samotné ochorenie pečene. Vírus C sa viaže na zdravú bunku tela, ktorá preniká do vnútra. V priebehu času sa šíri po celom tele, je to len dostať do krvi. Výsledkom je, že patogén preniká do pečene, spojí sa s bunkami a pracuje tvrdo. Hepatálne bunky (hepatocyty) pracujú pod vplyvom, podstupujú zmeny a z tohto zahynú. Čím dlhší je vírus C v pečeni, tým viac buniek zomrie. Postupom času sa rozvíjajú nebezpečné choroby vedúce k zhubnej degenerácii a smrti.

Infekcia pečene týmto typom vírusu sa nemôže v žiadnom prípade prejavovať zvonka. Po mnoho rokov alebo desiatky rokov sa infikovaná osoba cíti úplne zdravá a iba náhodná vyšetrenie najčastejšie odhaľuje patológiu. Pri darovaní krvi na hepatitídu sa skúma časť reťazca RNA (ribonukleovej kyseliny), ktorá je súčasťou ľudského génu (DNA). Výsledky laboratórneho výskumu by sa nemali používať na samošetrenie, pretože to je iba indikátor. Lekár určí presný obraz a ďalšiu diagnózu.

Po vykonaní: svedectvo o štúdii

Na potvrdenie HCV je priradená analýza PCR (polymerázová reťazová reakcia). PCR štúdie pomáhajú nájsť patogénny materiál v štruktúre RNA a predpísať účinnú liečbu. Určené v nasledujúcich prípadoch:

  • identifikácia príznakov zápalu pečene;
  • skríningové štúdie na prevenciu;
  • vyšetrovanie osôb v kontakte;
  • diagnostika hepatitídy zmiešaného pôvodu (definícia hlavného patogénu);
  • Určenie úrovne aktivity reprodukcie vírusu v chronickej forme;
  • cirhóza pečene;
  • na určenie účinnosti predpísanej liečby.
PCR štúdie sú pridelené lekárom na stanovenie účinnosti priebehu liečby hepatitídy.

Existuje kvalitatívna aj kvantitatívna analýza PCR. Kvantitatívna PCR ukazuje percento RNA s nosičmi vírusu v krvi a kvalitatívna PCR indikuje prítomnosť alebo absenciu vírusu. Pozitívny ukazovateľ kvality (prítomnosť RNA hepatitídy C) tiež vyžaduje kvantitatívnu štúdiu. Vysoká koncentrácia patogénu hepatitídy C súvisí s rizikom prenosu, to znamená s kontamináciou ostatných. Nízke množstvá sú lepšie spracované. Množstvo RNA vírusov v krvi sa netýka intenzity ochorenia. Analýza PCR sa tiež robí v prípade terapie interferónom, aby sa predpísalo trvanie a zložitosť liečby.

Vlastnosti kvalitatívnej analýzy PCR pre hepatitídu C

Menovaný kvalitatívnej analýze s indexom polymerázovej reťazovej reakcie, všetci pacienti, ktorí mali protilátky v krvi, pre hepatitídu C, ktorý bol chorý a výške, by mali znovu sa test. Odporúča sa, aby sa testuje na hepatitídu B a potom, v prípade, že pozitívny záver, a hepatitídy D. tiež kvalitatívne analyzovaný reakatsiya by sa malo uskutočniť v spojení s inými krvných testov. Analýzy ukážu kompletný obraz šírenia vírusu.

Z výsledkov testov bude vidieť len pozitívny test na hepatitídu C alebo negatívnu, čiže prítomnosť alebo neprítomnosť vírusu. Ak je záver "zistený", potom je vírus aktívne a naďalej aktívne. Označenie "nenájdené" označuje neprítomnosť vírusu alebo jeho malé množstvo. S týmto indikátorom by sa malo brať do úvahy skutočnosť, že analytická citlivosť diagnostických systémov je iná a RNA hepatitída C môže byť stále v krvi, ale v analýze sa nezobrazuje.

Obzvlášť citlivá metóda PCR ultra-hepatitídy C sa odhaľuje dokonca aj v nepatrných množstvách. Používa sa hybridizačná fluorescenčná štúdia, ktorá je mnohonásobne vyššia ako štandardné systémy PCR. Metóda sa používa v niekoľkých prípadoch:

  • podozrivé skryté formy hepatitídy C;
  • Diagnóza PCR nebola potvrdená patogénom, ale existujú protilátky;
  • v prípade obnovy;
  • identifikovať skorý štádiu infekcie.
Späť na obsah

Vysvetlenie analýzy

Konečné rozhodnutie v diagnostike je ovplyvnené PCR dekódovaním HCV, najmä ultrametódou. Hlavnou nevýhodou tohto výskumu je prísne dodržiavanie sterilných podmienok pre vzorku a materiály. Malá odchýlka niekedy preukazuje nepresné závery analytika, komplikuje diagnostiku a následnú liečbu. Analýza PCR na stanovenie RNA vírusu hepatitídy nie vždy ukazuje obraz choroby s dôverou, niekedy aj neprijateľné sú nepresnosti.

Pri diagnostike vírusu hepatitídy sa odporúča vykonať komplexné vyšetrenie.

Norma ukazovateľov

Neprítomnosť protilátok JgM voči RNA vo vírusovej hepatitíde C sa považuje za normu pri analýze polymerázovej reťazovej reakcie. Súčasne zistenia sérologickej analýzy naznačujú prítomnosť protilátok proti vírusu C a to je tiež v medziach normy. Kvalitatívna definícia neukazuje intenzitu ochorenia, odhaľuje len pôvodcu hepatitídy C v RNA. Takáto analýza sa po liečbe opakuje, aby sa potvrdila skutočná regenerácia.

odchýlky

Ak sú prítomné protilátky JgM proti HCV RNA, znamená to, že došlo k vzniku infekcie. Choroba je akútna alebo chronická, prejavuje sa v rôznych štádiách. Ak dôjde k poklesu počtu protilátok, analýza ukáže dosiahnutie výsledkov liečby počas regenerácie. V diagnostike sú veľmi zriedkavé prípady falošne pozitívnych zistení. Nachádzajú sa u žien počas tehotenstva a u ľudí s inými infekčnými chorobami.

Diagnóza hepatitídy C pomocou PCR

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) sa stále viac používajú v klinickej praxi na určenie príčiny rôznych vírusových ochorení, vrátane diagnostiky pre hepatitídy C.

Poradenstvo od hepatológov

V roku 2012 došlo k prelomu v liečbe hepatitídy C. Vyvinuli sa nové, priamo pôsobiace antivírusové látky, ktoré s pravdepodobnosťou 97% úplne uľavia od tejto choroby. Odvtedy sa hepatitída C oficiálne považuje za plne liečiteľné ochorenie v lekárskej komunite. V Ruskej federácii a krajinách SNŠ sú lieky zastúpené značkami cofosbuvir, daklataswir a lepidasvir. V súčasnosti sa na trhu objavilo veľa falzifikátov. Lieky vhodnej kvality je možné zakúpiť len od spoločností, ktoré majú licencie a príslušnú dokumentáciu.
Prejdite na webovú stránku oficiálneho dodávateľa >>

Pre svoju diagnózu je PCR vo svojich rôznych modifikáciách široko používaná. Pomocou PCR pre hepatitídu C je možné zistiť prítomnosť vírusu hepatitídy C v pacientovej krvi a presne ju diagnostikovať.

Variácie analýzy

Technika PCR sa sprístupnila lekárom pred niekoľkými desaťročiami. Je založená na viacnásobnom kopírovaní špecifického fragmentu vírusovej alebo bakteriálnej RNA alebo DNA, po ktorej nasleduje detekcia (rozpoznanie daného fragmentu) v krvnom sére pacienta.

V tomto prípade existujú dve zásadne odlišné metódy PCR-štúdia: kvantitatívne a kvalitatívne.

Kvalitatívna metóda iba umožňuje odpovedať na otázku, či sa jedná o biologický materiál (krvné sérum, sliny, spermie, atď...), ktorých genetický materiál konkrétneho vírusu?

Kvantitatívna metóda zasa umožňuje určiť množstvo tohto genetického materiálu, čo je v niektorých prípadoch nevyhnutné na určenie štádia ochorenia alebo na vyhodnotenie účinnosti liečby.

Kvalitatívny variant PCR v prípade choroby

Pomocou kvalitatívnu variant PCR analýzu v tejto choroby môže zistiť skutočnosť, že prítomnosť hepatitídy C vírusovej RNA v biologických tekutinách (sérum, sliny a podobne. D.) pacienta. Takže výsledok analýzy môže byť len dva druhy: pozitívny alebo negatívny. V tomto prípade je veľmi dôležité správne dekódovanie.

  • pozitívny výsledok pri určovaní RNA vírusovej hepatitídy C informuje lekára, že príslušná biologická tekutina obsahuje RNA vírusu. V súlade s tým, je pacient infikovaný s ňou, a preto možné diagnóza hepatitídy C. Avšak, vždy na pamäti, o možnosti falošne pozitívnych výsledkov analýzy;
  • Negatívne PCR analýza indikuje neprítomnosť HCV RNA v testovanej biologickej tekutine, alebo obsah molekúl RNA vo vzorke tekutiny bola príliš nízka a je pod hranicou citlivosti metódy PCR hranice. Negatívny výsledok testu nemusí vždy indikovať neprítomnosť vírusu v krvi. Možnosť falošných negatívnych výsledkov analýzy by mala vždy brať do úvahy ošetrujúci lekár.

S rozvojom akútnej formy hepatitídy C vedie vysokohodnotný PCR test k zisteniu skutočnosti choroby do 1-3 týždňov po vstupe víru do ľudského tela.

Falošné negatívne výsledky môžu byť dôsledkom:

  • dostať sa do biologického materiálu (krvi) znečisťujúcich látok;
  • Použitie heparínu na prevenciu zrážania krvi v skúmavke alebo jej použitie pacientom;
  • prenikanie látok zo životného prostredia do blokovaného materiálu, blokujúce enzýmy používané v PCR.

Pred vykonaním kvalitatívnej diagnostickej metódy PCR by pacient nemal dodržiavať špeciálne odporúčania. Z tohto dôvodu je potrebné na analýzu odobrať krv z žily pacienta.

Kvantitatívny variant PCR

Pomocou kvantitatívna analýza PCR na určenie nielen skutočnosť, že prítomnosť vírusu v krvi, ale aj množstvo vírusových častíc v akejkoľvek biologickej tekutine (tzv vírusová záťaž). Pomocou tohto typu PCR je možné určiť počet kópií HCV RNA, ktoré cirkulujú v určitom objeme.

Výsledok tohto typu PCR je vyjadrený číselnými hodnotami, pričom jednotkou merania sú medzinárodné jednotky na mililiter - ME / ml.

Vykonanie podobného typu diagnostiky PCR sa používa v určitý deň liečby vírusovej hepatitídy C. Prvá definícia vírusovej záťaže nastane, keď chorá osoba vstúpi do nemocnice. Ďalšia analýza sa vykonáva v 1., 4., 12. a 24. týždni od začiatku užívania liekov. Už v 12. týždni môžete povedať, či terapia je účinná alebo nie.

Nedávno som čítal článok, ktorý popisuje použitie komplexu liekov "SOFOSBUWIR DAKLATASVIR "na liečbu hepatitídy C. Vďaka tomuto komplexu sa môže FOREVER zbaviť HEPATITIS C.

Nebola som zvyknutá dôverovať žiadnym informáciám, ale rozhodla som sa ju skontrolovať a objednať ju. Lieky nie sú lacné, ale život je drahý! Nevidel som žiadne vedľajšie účinky tohto postupu, už som si myslel, že všetko je márne, ale o mesiac neskôr som prešiel testami a PCR nebola detegovaná, nebola nájdená po mesiaci liečby. Kardinálne zlepšená nálada, znovu tu bola túžba žiť a užívať si život! Vzal som liek 3 mesiace a v dôsledku toho sa vírus zmizol. Skúste a vy, a ak máte záujem, potom nasledujúci odkaz je článok.

Osobitne pripraviť pacienta na štúdium sa nevyžaduje. Odporúčame nefajčiť v deň testu. Ako testovací materiál sa používa krv z žily.

Po uskutočnení kvantitatívnej PCR je potrebné rozlíšiť získané výsledky. Pojem "norma" v takýchto prípadoch neexistuje. Pre dekódovanie sa používa špeciálne vyvinutá gradácia ukazovateľov:

  • Výsledky: nie je určené - RNA hepatitídy C v žilovej krvi pacienta nie je identifikovaný (negatívny výsledok), alebo obsahuje veľmi nízke množstvo neumožňuje spôsob jeho určenia (5 IU / ml - pozitívne testovacie Takéto vírusovej záťaže veľmi.. Ide o indikátor účinnosti terapie a zdarný priebeh choroby;
  • výsledok štúdie:> 8 * 10 5 ME / ml - výsledok pozitívneho testu. Úroveň zaťaženia je veľmi vysoká. Nesprávna prognóza priebehu choroby a potreba opraviť alebo nahradiť použité lieky.

Je dôležité mať na pamäti, že prijatá úroveň vírusovej záťaže neodráža závažnosť priebehu patológie a stupeň poškodenia pečene. Preto existujú iné metódy biochemického výskumu. Pre správny výber liečebných metód je potrebné poznať genotyp vírusu hepatitídy C.

Čo ukazuje vírusová záťaž?

  1. Vysoká koncentrácia vírusových častíc v biologických tekutinách, najmä v krvi, je spojená s vysokým rizikom prenosu vírusu počas pohlavného styku alebo počas tehotenstva od matky po plod.
  2. Počet vírusových častíc odráža účinnosť použitých liekov a umožňuje racionálny výber použitých liekov a dávok.

Ultrasenzitívna diagnostická metóda PCR

K dnešnému dňu môžete prejsť tzv. Ultra PCR na definíciu vírusu hepatitídy C. Kompletne sa táto metóda nazýva PCR s hybridizačno-fluorescenčnou štúdiou v reálnom čase.

Keď sa uvádza ultra-PCR:

  1. V prípadoch podozrenia na vírusovú hepatitídu C u pacientov s latentnými formami ochorenia.
  2. V prípadoch, keď pacient má protilátky proti vírusu hepatitídy C, ale nie je potvrdené diagnostikou PCR.
  3. Posúdiť účinnosť liečby a potvrdiť zotavenie.
  4. Ako skríningová metóda na včasnú detekciu ochorenia u ľudí v populácii.

Pre výskum je zvyčajne použitá venózna krv pacienta. Citlivosť ultra-metódy je nižšia ako 10 IU / l, čo je niekoľkonásobne vyššia ako štandardné kvantitatívne a kvalitatívne varianty diagnostiky PCR. Určenie metódy ultra PCR je vykonávané lekárom infekčnej choroby alebo hepatológa.

Rozhodujúcou etapou v diagnostike a hodnotení liečby je správna interpretácia výsledkov získaných metódou ultra PCR. Vždy stojí za to pamätať, že existuje malá šanca na získanie falošne negatívnych a falošne pozitívnych výsledkov.

Na odstránenie takýchto situácií je potrebné vylúčiť kontamináciu krvných vzoriek a laboratórnych materiálov. Použitím ultra PCR je možné vyhnúť sa situáciám, ktoré vedú k falošne negatívnym výsledkom a tým komplikovať diagnostiku.

Kvantitatívna analýza PCR pre hepatitídu C

Existuje mnoho subtypov HCV, preto nie je vždy možné vybrať účinné antivírusové lieky a dosiahnuť požadované výsledky liečby. Rozmanitosť patogénov je spôsobená ich schopnosťou meniť ich štruktúru, to znamená mutovať. Výsledkom je, že imunita nemá čas na vytvorenie silnej reakcie proti patogénnemu činidlu a lieky sú neúčinné.

Často sa diagnostikuje hepatitída v štádiu cirhózy, ktorá predisponuje neskoršiu detekciu ochorenia v dôsledku nedostatku klinických príznakov. Iba laboratórne testovanie dokáže detekovať HCV v inkubačnej dobe.

Kvantitatívna analýza hepatitídy C umožňuje nielen stanovenie prítomnosti patogénu v krvi, ale aj výpočet jeho koncentrácie.

Odporúčania na prípravu analýzy

Nevyžaduje sa špecifická príprava na laboratórnu diagnostiku. Stačí stačiť nasledovné odporúčania:

  1. kvantitatívna analýza sa vykonáva prázdnym žalúdkom s posledným jedlom 8 hodín pred krvou;
  2. na dva dni by mal byť opustený alkohol a "ťažké" jedlá;
  3. Lieky, ktoré pacient užíva, majú mimoriadny význam. Môžu ovplyvniť výsledok štúdie, takže o nich by mal lekár vedieť.

Aj ťažké fyzické námahy a fyzioterapeutické postupy v predvečer odberu krvi nie sú žiaduce. Kvôli dešifrovaniu kvantitatívnej analýzy hepatitídy C sa ukázalo ako spoľahlivé, nezanedbajte vyššie uvedené odporúčania.

Často pacient dostane výsledok analýzy za deň. Cena testu na určenie koncentrácie patogénu v krvi závisí od laboratória a kvality činidiel a môže dosiahnuť 4 000 rubľov.

Laboratórna diagnostika hepatitídy C

Medzi primárne diagnostické metódy patrí test ELISA alebo inak imunosorbentný test enzýmov. Je určená na detekciu špecifických protilátok proti HCV. Jeho účinnosť dosahuje 95%. Ak prepis štúdie prináša pozitívny výsledok, stojí za to podozrenie na prítomnosť činidla v krvi.

Treba poznamenať, že polovica testovaných jedincov s "+" testom v priebehu ďalšej diagnostiky nezaznamenáva vírusovú látku v krvi. Test ELISA v tomto prípade indikuje predchádzajúci kontakt s HCV v minulosti, čo je potvrdené cirkulujúcimi protilátkami.

Presnejšou štúdiou je polymerázová reťazová reakcia alebo PCR. Umožňuje určiť koncentráciu RNA patogénu v krvi. Po objavení genetického súboru vírusu v biologickom materiáli doktor potvrdí hepatitídu C.

PCR je priradená pacientovi na overenie diagnózy. Umožňuje identifikovať RNA v štádiu, keď protilátky ešte nie sú k dispozícii. Existuje niekoľko typov genetických štúdií:

  1. kvantitatívna analýza PCR pre hepatitídu C, ktorá nielen stanovuje prítomnosť patogénu v krvi, ale poskytuje aj informácie o jeho koncentrácii;
  2. kvalita - potvrdzuje infekciu;
  3. genotypizácia - umožňuje určiť genotyp patogénneho agens a vybrať najúčinnejšie lieky proti nemu.

Polymerázová reťazová reakcia

Ako už bolo uvedené, existuje niekoľko typov laboratórneho výskumu:

  • kvalitatívna analýza - indikuje prítomnosť patogénneho činidla v krvi. Tento typ diagnózy má určitú "úroveň odpovede", takže nie je vždy spoľahlivý. Na správne dešifrovanie výsledkov a získanie skutočných indikátorov sa odporúča použiť testovací systém s citlivosťou najmenej 50 IU / ml pre štúdiu. Normou analýzy je "negatívna odpoveď" alebo "vírus nie je detegovaný." To naznačuje nedostatok genetického súboru patogénov v testovacom materiáli. Ak bol výsledok pozitívny, vyžaduje sa ďalšie vyšetrenie pacienta;
  • kvantitatívna analýza PCR pre hepatitídu C určuje vírusovú záťaž, teda koncentráciu patogénneho činidla v krvi. Výsledok štúdie ukazuje počet RNA jednotiek v pevnom objeme biologickej tekutiny;

Vírusová záťaž je počet infekčných RNA v jednom mililitroch krvi výskumníka. Jednotky merania sú ME / ml, ale niektoré laboratóriá určujú "kópie / ml", zatiaľ čo označujú vzorku analytického štandardu na porovnanie a vyhodnotenie výsledkov.

  • genotypu. Vzhľadom na schopnosť patogénu meniť výber účinných antivírusových liekov na terapiu by mal byť založený na jeho genotype. Závisí to nielen na výsledku, ale aj na trvaní liečby. Takže HCV 1 hepatitída vyžaduje lieky na jeden rok, ale iba 60% prípadov vykazuje pozitívnu dynamiku. Pokiaľ ide o druhý a tretí genotyp, sú menej rezistentné voči účinku antivírusových činidiel, a preto účinnosť liečby presahuje 85%. Pri získaní takéhoto výsledku výskumu - "vírus nie je napísaný", stojí za to pochybovať o prítomnosti činidla, ktoré nie je rozpoznané štandardnými testovacími systémami.

Indikácie pre analýzu

Výklad kvantitatívnej analýzy hepatitídy C je potrebný na:

  1. ďalšie vyšetrenie pacienta, keď boli pomocou ELISA detegované protilátky proti HCV;
  2. potvrdenie diagnózy;
  3. stanovenie vírusovej záťaže v prípade zmiešanej infekcie, keď je osoba nakazená niekoľkými druhmi patogénov;
  4. určenie taktiky liečby (výber antivírusových liekov, ich náhrada alebo ukončenie terapie);
  5. posúdiť dynamiku progresie ochorenia, ako aj účinnosť liekov;
  6. stanovenie štádia patológie (akútna, chronická).

PCR má nasledujúce výhody:

  1. dobrá citlivosť, vďaka čomu je možné počítať aj malé množstvo vírusu;
  2. stanovenie samotného patogénu (RNA), nie antigénov;
  3. špecifičnosť techniky - vytvorenie špecifického typu patogénneho činidla;
  4. rýchlosť získania výsledkov, pretože pre analýzu nevyžaduje kultiváciu plodín na živnom médiu. Odpoveď je pripravená za 5 hodín;
  5. univerzálnosť - umožňuje identifikovať genetickú sadu rôznych patogénov, a to ako RNA, tak DNA (hepatitída B);
  6. detekcia latentnej infekcie.

Laboratórny test pomáha potvrdiť diagnózu a je neoddeliteľnou súčasťou komplexného vyšetrenia (analýza klinických symptómov, výsledky ELISA a biochémie).

Okrem toho sa PCR bežne používa v oblasti alergológie, genetiky, ako aj na určenie skutočnosti otcovstva.

Dekódovanie kvantitatívnej analýzy vírusu hepatitídy C

Hodnotenie výsledkov laboratórnej diagnostiky vykonáva lekár porovnaním získaných údajov s normou.

Kvalitatívna a kvantitatívna analýza PCR pre hepatitídu C: negatívne, pozitívne, dekódovanie

Hepatitída C je vírusové ochorenie pečene spôsobené flavivirusom HCV (z anglického vírusu hepatitídy C), ktorý obsahuje molekulu ribonukleovej kyseliny (RNA). RNA nesie genetický kód vírusu. Jeho prítomnosť umožňuje analýzu PCR pre hepatitídu C.

HCV je nebezpečenstvo pre človeka a to tzv sérologické okno (čas medzi infekciou a vzhľadu reakcie imunitného systému), môže byť dostatočne dlhý - od niekoľkých týždňov do šiestich mesiacov.

Toto neodhalí infekciu a začne liečbu včas.

V závislosti od individuálnych vlastností hostiteľského tela sa môže HCV prejaviť v akútnej forme a môže sa vyvinúť aj ako chronické ochorenie, ktoré si vyžiada dlhodobé a drahé liečenie. Pri detekcii protilátok proti HCV sa vykonáva niekoľko laboratórnych testov vrátane PCR pre hepatitídu C. Tento test sa uskutočňuje pre všetkých ľudí, v ktorých krvi sa našli protilátky proti HCV.

Čo je analýza PCR?

Laboratórna analýza PCR pre hepatitídu C - štúdium biologického materiálu na identifikáciu prítomnosti flavavírusu.

Polymerázová reťazová reakcia (ako skratka je dešifrovaná) ukazuje kvantitatívnu hodnotu vírusového poškodenia organizmu, jeho kvalitatívne charakteristiky a tiež genotyp vírusu obsahujúceho RNA.

Na základe týchto údajov a na základe ďalších analýz sa určuje spôsob a trvanie liečby, ako aj epidemiologický faktor (riziko prenosu na iného nosiča).

Čo je analýza RNA pre hepatitídu C?

Hepatitída C sa tiež nazýva analýza RNA (HCV RNA), pretože nie je známa. Flavavírus obsahuje časticu RNA s viriónovou veľkosťou 30-60 nm. Jednou z charakteristík tohto mikroorganizmu je vysoká tendencia k mutáciám.

Každý z poddruhov (genotypov) vírusu má odlišnú rezistenciu, ktorá spôsobuje rôzne spôsoby liečby a povahu ďalšej prognózy pre pacienta.

Biologický materiál (žilovej krvi) je riešené pôst a zvyčajne testované PCR v reálnom čase (vysoko citlivé v reálnom čase, diagnostika na stanovenie dolnej medze 15 IU / ml za použitia automatického režimu uzatvorený systém).

Existujú aj ďalšie testy, napríklad COBAS AMPLICOR s citlivosťou 50-100 IU / ml. Pri akejkoľvek laboratórnej štúdii je prah citlivosti dôležitý, t.j. schopnosť činidla detegovať minimálnu koncentráciu vírusu v biologickom materiáli.

Druhy analýzy hepatitídy C pomocou metódy PCR

PCR pre hepatitídu C zahŕňa tri dôležité zložky:

  • kvalitatívna analýza;
  • kvantitatívna analýza;
  • genotypu.

Tieto testy môžu určiť povahu virémie, ako aj genetické znaky patogénu. V závislosti od citlivosti diagnostického systému sa test vykoná raz a niekedy sa vykoná druhá skúška s citlivejšou činidlom, ktorá potvrdí alebo spresní výsledky.

Vysoko kvalitná PCR proti hepatitíde C

PCR analýza kvality hepatitídy C je ďalším bežným názvom pre analýzu polymerázovej reťazovej reakcie. Štandardná citlivosť testu, ktorá umožňuje zistiť prítomnosť vírusovej lézie, je v rozmedzí od 10 do 500 IU / ml.

Negatívna analýza PCR pre hepatitídu C ukazuje, že koncentrácia vírusu v krvi pacienta je pod hranicou náchylnosti diagnostického systému.

Ak kvalitatívna PCR poskytla odpoveď "nezistená", potom je pre následnú liečbu dôležité poznať prah citlivosti činidla.

Proteínové frakcie na vírus flava sa objavujú oveľa neskôr.

Kvantitatívna PCR pre hepatitídu C

Kvantitatívna PCR hepatitídy C je indikátorom vírusovej záťaže, ktorá odráža hladinu koncentrácie RNA vírusu FLAV v tele. Toto je ukazovateľ, ktorý ukazuje, koľko fragmentov vírusovej RNA je obsiahnutých na jeden kubický centimeter krvi. PCR hepatitídy výsledkov Kvantitatívne skúška C RNA v konvenčnom systéme sú uvedené v medzinárodných jednotkách na ml (IU / ml), a môžu byť zaznamenané v rôznymi spôsobmi, napríklad - 1,7 ppm alebo 1,700,000 IU / ml.

Kvantitatívna PCR diagnostika hepatitídy C sa podáva pacientom pred začiatkom antivírusovej liečby av 12. týždni liečby na vyhodnotenie výsledkov vybranej metódy boja proti HCV. Vírusová záťaž vám umožňuje identifikovať tri dôležité indikátory ochorenia:

  • infekčnosť, t.j. stupeň rizika prenosu vírusu z jedného nosiča na druhý (čím je vyššia koncentrácia flavavírusovej RNA, tým vyššia je pravdepodobnosť infekcie inej osoby, napríklad počas sexuálneho kontaktu);
  • metóda a účinnosť liečby;
  • trvanie a prognóza antivírusovej terapie (čím vyššie je vírusové zaťaženie, tým dlhšie trvá liečba).

Kvantitatívna PCR diagnostika hepatitídy C závisí od typu laboratórneho testu a prahu jeho citlivosti. Dolná hranica normy sa zvyčajne považuje za až 600 000 IU / ml, priemerná hodnota je v rozmedzí 600 000-700 000 IU / ml. Výsledky z 800 000 IU / ml a vyššie sa považujú za vysoké hladiny vírusu obsahujúceho RNA.

genotypu

Vzhľadom na vysokú mutačnú aktivitu HCV v prírode je dôležité v štádiu testovania určiť, ktorý genotyp vírusu je v krvi pacienta. Celkovo je na planéte zaznamenaných 11 genotypov vírusu hepatitídy C, ktoré zahŕňajú mnoho poddruhov. Na území Ruskej federácie sú 1, 2 a 3 spoločné.

PCR RNA hepatitídy C spolu s genotypizáciou je veľmi dôležitou súčasťou analýzy, pretože umožňuje lekárovi určiť rezistenciu (rezistenciu) vírusu, vybrať vhodné lieky a predpísať priebeh liečby.

Genotypovanie vám tiež umožňuje nepriamo určiť stav pečene. Napríklad genotyp 3 HCV je často sprevádzaný steatózou, v ktorej sa tuk nahromadí v bunkách tela.

Krvný test na PCR pri hepatitíde C by mal poskytnúť číslo, ktoré určuje genotyp. V laboratórnych odpovediach môže byť napísané "nešifrované" - a to znamená, že v ľudskej krvi existuje vírus, ktorý nie je určený skúšobným systémom. To môže naznačovať, že genotyp nie je pre danú geografickú oblasť charakteristický. V tomto prípade je potrebné opätovne prejsť analýzou s vyššou citlivosťou diagnostického systému.

Dekódovanie analýzy PCR pre hepatitídu C

Test na PCR proti hepatitíde C možno kvantifikovať na základe vyššie uvedených údajov. Pri prijímaní výsledkov laboratórnych testov sa zvyčajne uvádzajú tieto údaje:

  • "Nájdené" / "nenájdené" (vysoko kvalitná PCR pre hepatitídu C);
  • množstvo frakcií obsahujúcich RNA, napríklad 831,680 IU / ml (kvantitatívny PCR test);
  • číslo, ktoré určuje HCV genotyp, napríklad - 1, 2, 3, 4;
  • názov testu je najčastejšie v reálnom čase.

Najdôležitejšie je pri dešifrovaní PCR analýzy hepatitídy C druhá položka, ktorá ukazuje vírusovú záťaž určujúcu prognózu, spôsob a trvanie liečby.

Ak je analýza PCR pre hepatitídu C negatívna a ELISA pozitívna - čo to znamená?

Na dešifrovanie laboratórnych testov je dôležité kontaktovať špecialistu na hepatológiu alebo infekčnú chorobu, ktorý vysvetlí informácie prijaté v súlade s typom diagnostického systému a prahovou citlivosťou. V lekárskej praxi existuje veľa údajov o krvných testoch, ktoré môžu viesť k zámene osoby bez lekárskej výchovy.

Napríklad, v prípade, že test na HCV PCR negatívne a pozitívne ELISA, môže to znamenať, že v tomto okamihu v krvi pacienta nie je HCV, ale pred tým, než trpel akútnej formy hepatitídy C. Predpokladá sa, že pozitívny-linked ImmunoSorbent assay (ELISA), ukazuje, že v krvi sú produkované protilátky po invázii vírusu v minulosti. V modernej medicínskej praxi sa však analýza ELISA považuje za dostatočne spoľahlivú a často poskytuje atypické výsledky, takže lekári ju používajú ako primárne vyšetrenie. Pri diagnostike ochorenia sa špecialisti riadia presne pomocou PCR testov.

Užitočné video

V nasledujúcom videu je veľmi podrobné a zaujímavé povedať, aký je podstatou metódy PCR, ako sa vykonáva analýza:

záver

Venózna krv sa zvyčajne užíva na analýzu PCR s hepatitídou C. Najčastejšie ide o dvojité odbery biologického materiálu - pre test ELISA a priamo pre test PCR. Pre správne výsledky testov sa vyžaduje súlad s hlavnými pravidlami laboratórneho odberu vzoriek biologického materiálu:

  • krv na analýzu sa podáva ráno na prázdny žalúdok;
  • medzi jedlom a krvou by mala trvať najmenej 8 hodín;
  • Pred vykonaním testu by ste mali tiež vylúčiť alkohol a vyprážané potraviny;
  • Počas dňa pred podaním krvi sa musíte vyhnúť vysokej fyzickej námahe.

Výsledky krvného testovania sú zvyčajne pripravené na ďalší deň.

Analýza PCR pre hepatitídu C

Diagnóza hepatitídy zahŕňa celý komplex testov na určenie prítomnosti vírusu v krvi. Jedným zo spôsobov, ako zistiť ochorenie, je metóda PCR ako reakcia na hepatitídu C. Čo je to dôvod, prečo je PCR analýza hepatitídy taká dôležitá, ako sa vykonáva a dekóduje?

Čo je to?

Polymerázová reťazová reakcia alebo PCR sa používa na diagnostiku žalúdočných vredov, kolitídy, enteritidy. Jeho hlavnou výhodou je, že pomáha detegovať v tele samotný samotný vírus hepatitídy C a protilátky proti nemu, ktoré majú schopnosť spôsobiť, že imunitný systém nereaguje kvôli svojej schopnosti mutovať.

Štúdiou a jej podstatou je vytvoriť určité podmienky, v ktorých dochádza k reakcii reťazca hepatitídy RNA. Ak sa v porovnaní s nukleotidovou sekvenciou vírusu hepatitídy C zistí náhoda, znamená to, že v krvi sú vírusové častice a rozpad sa vyskytuje v pečeni. Ak je množstvo vírusu pod určitou úrovňou, urobí sa negatívna diagnóza, ak je vyššia - pozitívna.

Existujú dva typy krvných testov s použitím metódy PCR na hepatitídu: kvantitatívna analýza a kvalitatívna analýza.

Kvantitatívna PCR, ako je uvedené vyššie, určuje koncentráciu RNA vírusu hepatitídy. Okrem toho je schopný poskytnúť informácie o intenzite, s akou sa patológia vyvíja a o účinnosti predpísanej liečby. Kvantitatívna analýza hepatitídy C je mimoriadne dôležitá, pretože stanovuje odolnosť voči antivírusovým liekom a umožňuje upraviť liečbu.

Po ukončení liečby pacientom pomáha PCR pri určovaní ďalšieho poradia predpisov. V niektorých prípadoch sú potrebné ďalšie prieskumy. Napríklad, ak je hladina ALP zvýšená (ale nie viac ako 2 krát za pol roka) a analýza indikuje vírusové zaťaženie nad 105 IU / ml, pacientovi bola pridelená biopsia. Ak kvantitatívna analýza PCR zistí silný zápal a fibrózu, pacientovi sa predpíše liečebný postup s antivírusovými liekmi.

V situáciách, v ktorých je veľký počet vírusových častíc kombinovaných s vysokým ALT, musí byť pacient okamžite liečený bez ďalších diagnostických opatrení.

Vykonajte tento test a zistite, či máte problémy s pečeňou.

Kvalitatívnu interpretáciu ukazovateľov kvantitatívnej analýzy krvi na hepatitídu môžu kvalifikovaní a skúsení odborníci a moderná technológia to pomáha pri nízkych koncentráciách vírusu v krvi.

Kvalitatívna PCR analýza je zameraná na určenie a potvrdenie skutočnej prítomnosti vírusu v tele. Vykonáva sa s detekciou protilátok proti hepatitíde v krvi. Ide o kvalitatívne test na hepatitídu zaručiť presnosť výsledku o 100% a umožňuje diagnostikovať v skorých štádiách ochorenia, čo umožňuje bojovať proti hepatitíde B počas prvých týždňov po infekcii a zvyšuje šance na úplné vyliečenie (v prípade ochorenia typu B).

Výhody PCR

Pri skúmaní metódy PCR a dešifrovaní krvného testu na hepatitídu je tiež možné určiť genotyp pôvodcu ochorenia. Existuje 6 genotypov vírusu a veľké množstvo podtypov, ale v našom regióne je distribúcia 1, 2 a 3 genotypov.

Ďalšie výhody tohto typu diagnostiky sú:

  • Vysoká presnosť prijatých indikátorov a nízka pravdepodobnosť chýb v nich;
  • vysoká citlivosť na vírusové častice v krvi;
  • možnosť detekcie viacerých patogénov;
  • diagnostika patogénnych intracelulárnych mikroorganizmov, ktoré majú vysokú antigénnu variabilitu;
  • práca s dekódovaním analýzy hepatitídy umožňuje zistiť latentné prúdové infekcie.

Komu vymenúva

Analýza PCR pre hepatitídu nutne zahŕňa nasledujúce kategórie ľudí:

  • tehotné ženy;
  • zamestnanci zdravotníckych zariadení;
  • potenciálnych darcov krvi a orgánov;
  • tých, ktorí majú charakteristické príznaky choroby;
  • HIV-infikované osoby;
  • drogovo závislých;
  • osoby vedúce promiskuitný sexuálny život.

Ako sa vykonáva analýza a vyžaduje sa odborná príprava?

Vzorky krvi na PCR sa vykonávajú z žily. Zvyčajne to nastane ráno, kým osoba jedla, pretože po jedení musí prejsť minimálne 8 hodín. V extrémnych prípadoch môže byť krv odobratá na vyšetrenie denne alebo večer, ale časová medzera medzi analýzou a príjmom potravy by mala byť aspoň 5 hodín.

Ľudský faktor sa môže vo výsledkoch kvantitatívne odzrkadliť: ich presnosť sa v niektorých prípadoch znižuje zo 100% na 95%, preto je nevyhnutné pripraviť na dodávku krvi vopred. Kvalita biomateriálu na analýzu bude vhodná, ak pacient dodržia tieto pravidlá:

  • Pred dávaním krvi môžete piť len čistú vodu;
  • počas dvoch dní predtým, ako by sa štúdie odmietla prijímať vyprážané a mastné potraviny, ako aj alkoholické nápoje;
  • deň pred návštevou laboratória prestať užívať lieky. V prípade, že to nie je možné, je absolútne nevyhnutné upozorniť ošetrujúceho lekára a ošetrujúceho lekára;
  • v predvečer stresových situácií a fyzickej námahy;
  • Neprechádzajte pomocou ultrazvukových, rádiologických a inštrumentálnych štúdií krátko pred odberom krvi;
  • hodina pred analýzou by sa mala zdržať fajčenia;
  • 20 minút pred dodaním krvi treba rozptýliť, uvoľniť a dokonca dýchať.

Ak test vykoná dieťa mladšie ako 5 rokov, rodičia by mali zabezpečiť, aby pili varenú vodu každých 10 minút počas pol hodiny pred odberom vzoriek biomateriálu.

Vysvetlenie prijatých údajov

Analýzu možno prezentovať slovom (v prípade kvalitatívneho výskumu), napríklad "nenájdený" alebo "pod rozsahom zmien". V prvom prípade to znamená, že infekcia nebola zistená. V druhej - že je prítomný vírus, ale v malom množstve. Táto situácia si vyžaduje opätovné preskúmanie.

Vírusová záťaž je určená množstvom infekčnej RNA a je označená ako ME / ml alebo kópie / ml.

Normálny ukazovateľ (norma) kvantitatívnej analýzy hepatitídy C je rozsah od 1,8 x 102 do 2,4 x 107 IU / ml.

Koncentrácia vírusu v krvi môže byť:

  • nízka: od 600 IU / ml do 3x104 / ml;
  • priemer: od 3x10 4 IU / ml do 8x10 5 IU / ml;
  • vysoká: viac ako 8x10 5 IU / ml.

Kvantitatívna a kvalitatívna analýza PCR pre hepatitídu umožňuje určiť prítomnosť vírusu v tele a úroveň jej koncentrácie. Polydizovaná reťazová reakcia je schopná diagnostikovať ochorenie už v počiatočnom štádiu, ale na to je potrebné, aby pacienti čo najskôr kontaktovali lekárske inštitúcie o pomoc a prísne dodržiavali odporúčania lekára.

Štúdia PCR pre hepatitídu C: typy, indikácie, transkript

Vírusová hepatitída C je závažné ochorenie, ktoré sa vyskytuje pri poškodení pečene. V ôsmich percentách pacientov prechádza do chronickej formy. Vírus sa množí v pečeňových bunkách - hepatocytoch - a spôsobuje ich smrť. Mŕtve tkanivo sa nahradí ložiskami spojivového tkaniva, vyvíja sa fibróza.

S rozvojom fibrózy pečene, je schopný plniť svoju funkciu, začína cirhóza, čo je nebezpečné pre jeho komplikácií: zvyšujúci sa tlak v portálnej žile, gastrointestinálne krvácanie, poruchy zrážanlivosti krvi, mentálne zmeny kvôli poškodeniu mozgu jadra toxických produktov.

Príčinou tohto ochorenia je infekcia vírusom z rodiny Flaviviridae, čo je typ vírusu RNA. To znamená, že genetický materiál, pomocou ktorého sú syntetizované proteíny patogénu, je kódovaný molekulou kyseliny ribonukleovej. Infekcia sa prejavuje krvou, sexuálne a od tehotnej ženy až po plod. Bohužiaľ, medzi infekciou a začiatkom produkcie protilátok môže prejsť pomerne veľké množstvo času - od dvoch týždňov až po šesť mesiacov. To neumožňuje určiť infekciu metódou enzýmovej imunoanalýzy a začať liečbu v počiatočných štádiách.

Čo je analýza PCR?

PCR je metóda molekulárnej analýzy, ktorá umožňuje detekciu genetického materiálu patogénu už v prvom týždni po infekcii použitím polymerázovej reťazovej reakcie. Štúdia má vysokú špecifickosť, presnosť a umožňuje nielen určiť prítomnosť alebo neprítomnosť vírusu, ale aj jeho koncentráciu a genotyp.

Pre túto štúdiu vezmite pacientovu krv, v ktorej sa môže potenciálne nájsť RNA vírusu. V krvi sa pridajú priméry - umelo syntetizované časti požadovaného génu malej dĺžky a RNA polymeráza je špeciálnym enzýmom, ktorý znásobuje množstvo genetického materiálu patogénu. Pomocou špeciálneho zariadenia sa vykonáva niekoľko cyklov vykurovania a chladenia. Materiál sa potom analyzuje a porovná so známymi vírusovými génmi, na základe ktorých sa dospelo k záveru o prítomnosti alebo neprítomnosti infekcie.

Typy PCR analýzy pre hepatitídu C

Existujú tri typy analýzy PCR:

  1. Kvalitatívna analýza PCR. Prvá fáza štúdie. Umožňuje vám identifikovať genetický materiál vírusu v krvi.

  • Kvantitatívna analýza PCR. Umožňuje určiť vírusovú záťaž - koncentráciu genetického materiálu patogénu v jednom mililitroch krvi. Táto štúdia sa uskutočňuje pred začiatkom liečby a potom v prvom, štvrtom, dvanástom a (ak je kurz dlhý) v dvadsiatom štvrtom týždni liečby, aby sa vyhodnotila jeho účinnosť.

  • genotypu. Príčinná látka hepatitídy C často a rýchlo mutuje. Na planéte bolo nájdených sedem variant genotypu tohto vírusu. V Rusku sú spoločné prvé, druhé a tretie typy. Každý z genotypov má rôznu rezistenciu voči terapii, napríklad účinnosť liečby prvého typu je šesťdesiat percent a pre druhý a tretí dosiahne osemdesiatpäť. Preto, aby sa vybrali vhodné lieky a aby sa predpísal postup liečby s dostatočným trvaním, je potrebné presne určiť, ktorý typ vírusu je pacient infikovaný.
  • Indikácie pre analýzu PCR pre hepatitídu C

    Štúdia PCR je predpísaná v nasledujúcich prípadoch:

    • kontakt s chorým, čo by mohlo viesť k infekcii;
    • pozitívna enzýmová imunoanalýza;
    • príznaky cirhózy pečene: zmeny veľkosti pečene, zväčšená slezina, výskyt podkožného venózneho plexu na bruchu;
    • výskyt príznakov poškodenia pečene: bolesť na pravej strane brucha, žltnutie kože;
    • zvýšená aktivita ALT a AST v biochemickej analýze krvi;
    • pred začiatkom liečby na určenie vírusovej záťaže;
    • sledovať účinnosť antivírusovej liečby;
    • po dokončení liečby na monitorovanie relapsu;
    • v prítomnosti diagnostikovanej hepatitídy B, aby sa vylúčilo zmiešané poškodenie pečene.

    Dekódovanie štúdie PCR pre hepatitídu C

    Dekódovanie analýzy PCR a enzýmovej imunoanalýzy pre hepatitídu C by mal riešiť špecialista na hepatológiu alebo infekčnú chorobu. Analýza výsledkov PCR je potrebná v kombinácii s biochemickým krvným testom, biopsiou a ultrazvukom. Iba kvalifikovaný lekár bude schopný analyzovať výsledky štúdií a na základe nich predpísať správnu liečbu.

    Dekódovanie kvalitatívnej analýzy.

    Genetický materiál patogénu sa našiel v analyzovanom biologickom materiáli. Infekcia je potvrdená.

    Neexistuje žiadna infekcia alebo množstvo RNA patogénu je pod hranicou citlivosti.

    Dekódovanie kvantitatívnej analýzy.

    Normálna postava pre zdravých ľudí. Znamená to, že v testovanom materiáli nie je prítomná RNA hepatitídy C alebo jej koncentrácia je pod hranicou citlivosti v štúdii.

    Koncentrácia RNA je pod rozsahom kvantifikácie. Takéto výsledky sú interpretované veľmi opatrne, korelujú ich s údajmi z iných štúdií a často vykonávajú druhú štúdiu.

    Úroveň vírusovej záťaže pri danej koncentrácii sa považuje za nízku. Zvyčajne zníženie množstva vírusu znamená, že terapia je úspešná.

    Viac ako 8 * 10 ^ 5 IU / ml

    Úroveň vírusovej záťaže pri danej koncentrácii sa považuje za vysokú.

    Viac ako 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

    Množstvo RNA je nad hornou hranicou rozsahu kvantifikácie. Nie je možné vyvodiť závery o stupni vírusovej záťaže s týmto výsledkom. Zvyčajne sa v takýchto prípadoch opakuje test s riedením vzorky krvi.

    Dekódovanie genotypizácie.

    Bola detegovaná RNA špecifického genotypu

    V biomateriáli sa deteguje vírus hepatitídy C špecifického genotypu a podtypu. Výsledok je kódovaný rímskymi číslicami a latinkami, napríklad - 1a, 2b. Existuje sedem genotypov a šesťdesiat sedem podtypov, avšak v Rusku existujú iba tri prvé typy.

    Bola detegovaná RNA vírusu hepatitídy C

    V krvi sa RNA nachádza ako vzácny genotyp pre Rusko, ktorý nemožno pripísať prvému, druhému ani tretiemu typu. Je potrebný ďalší výskum.

    Tento výsledok naznačuje, že pacient je zdravý, alebo že úroveň RNA patogénu je príliš malá.

    Situácia je možná, keď je analýza PCR pre hepatitídu C negatívna a enzýmová imunoanalýza deteguje protilátky proti vírusu. To znamená, že pacient mal hepatitídu C v akútnej forme a uzdravil sa. Približne dvadsať prípadov infekcie vedie k spontánnemu vyliečeniu, ak pacientovo telo vykazuje dostatočnú odolnosť voči infekcii.

    Napriek tomu, že PCR je vysoko presná analýza, jej výsledky môžu byť deformované v nasledujúcich situáciách:

    • krv bola prepravovaná do laboratória za neprimeraných podmienok, teplotný režim bol porušený;
    • vzorka biomateriálu bola kontaminovaná;
    • v krvi boli zvyšné stopy heparínu a iných antikoagulancií;
    • V skúmanej látke boli inhibítory - látky, ktoré spomaľujú alebo zastavujú polymerázovú reťazovú reakciu.

    Výhody PCR v porovnaní s inými metódami

    1. Diagnóza v počiatočných fázach. PCR deteguje genetický materiál pôvodcu ochorenia. Pomocou imunofluorescenčnej analýzy je možné určiť iba imunoglobulíny - látky, ktoré telo produkuje ako odpoveď na infekciu. V prípade infekcie spôsobenej hepatitídou C môže byť interval medzi infekciou a nástupom imunitnej odpovede niekoľko týždňov a mesiacov, kedy bude ELISA neúčinná. PCR poskytne odpoveď už v prvom týždni po infekcii.

  • Nízka pravdepodobnosť chyby. V študovanom materiáli sa určuje genetický materiál, ktorý je charakteristický iba pre jeden typ patogénov. To vám umožňuje vylúčiť falošné výsledky. Pomocou testu ELISA sú možné chyby, pretože rovnaký druh protilátok sa môže uvoľniť proti rôznym vírusom - takéto protilátky sa nazývajú krížovo reaktívne.

  • Vysoká citlivosť. PCR môže detegovať RNA patogénu aj v minimálnych množstvách. To umožňuje identifikovať skryté infekcie.
  • Ako sa pripraviť na dodanie krvi na výskum PCR

    Pri analýze PCR sa na hepatitídu C odoberá žilná ​​krv. Zvyčajne sa z pacientovej žily okamžite odoberú dve časti krvi: prvý sa odošle na PCR a druhý pre ELISA. To sa robí s cieľom presnejšie posúdiť, ako veľmi je pacient infikovaný vírusom a ako proti nemu bojuje imunita.

    Zvyčajne sa od pacienta vyžadujú nasledujúce pravidlá:

    • krvný test sa vyšetruje ráno;
    • prestávka medzi posledným jedlom a dodaním krvi by mala byť 8 až 10 hodín;
    • dva alebo tri dni pred analýzou sa musíte vzdať smažených a mastných jedál a alkoholu;
    • dvadsaťštyri hodín pred analýzou by sa mal pacient vyhnúť fyzickej námahe: nenosia váhy, nechodia do telocvične ani do bazéna.

    Predchádzajúci Článok

    Invazívne choroby

    Nasledujúci Článok

    Fibróza v pečeni

    Súvisiace Články Hepatitída