Odrody a nevyhnutnosť použitia PCR štúdií

Vírus hepatitídy C je vírus, ktorý obsahuje molekulu RNA. Je schopný vyhnúť sa imunitnej odpovedi tela kvôli vysokým schopnostiam pre mutáciu. Existuje šesť hlavných genotypov vírusu a mnohých podtypov. V našom regióne sú bežné najmä genotypy 1, 2 a 3.

V 75 - 80% ochorenia ide do chronickej formy, ktorá spôsobuje fibrózu pečene - stav, v ktorom je pečeňové tkanivo nahradené spojivovým tkanivom. Fibróza naopak vedie k rakovine alebo cirhóze. Hlavným spôsobom prenosu choroby je krv. Ak má osoba indikáciu na testovanie hepatitídy C, vykonajú sa dva základné testy. Identifikujte protilátky proti vírusu a v ich neprítomnosti sa verí, že nemá hepatitídu. Ak je v krvi prítomná prítomnosť protilátok proti vírusu hepatitídy, vykoná sa analýza PCR.

RNA je táto metóda určená v krvi už 10-12 dní po infekcii a indikuje, že vírus sa aktívne množí v tele. Počas tohto obdobia je jednoducho nemožné detekovať vírus iným spôsobom, pretože ešte nevytvára špecifické protilátky a poškodenia pečene sú stále neviditeľné v biochemických analýzach a biopsii.

Odrody výskumu s použitím metódy PCR

Analýza pomocou polymerázovej reťazovej reakcie má určité výhody:

1. Pri takejto štúdii je určený samotný vírus, nie produkty jeho vitálnej aktivity. V tomto prípade je možné určiť typ patogénu.
2. Táto technika má vysokú špecifickosť vďaka tomu, že sa skúma iba určitá oblasť DNA, pravdepodobnosť získania chybných výsledkov sa znižuje.
3. Má veľmi vysokú citlivosť, dokonca aj minimálne množstvo vírusu v krvi.

Existujú dve hlavné metódy krvného testovania hepatitídy C pomocou PCR: kvalitatívna a kvantitatívna PCR analýza. Na určenie prítomnosti vírusu sa používa kvalitatívna metóda. Všetkým, ktorí mali protilátky proti hepatitíde v krvi, sa urobí analýza. Výsledok môže byť iba dvoch typov: "zistené" a "nezistené", posledná hodnota sa považuje za normu.

Pozitívny výsledok testu znamená, že vo vzorke boli nájdené fragmenty vírusovej RNA, čo zase naznačuje, že osoba bola infikovaná hepatitídou. V prípade negatívneho výsledku sú možné dve možnosti: nedošlo k žiadnej infekcii alebo jej koncentrácia je taká nízka, že táto metóda nie je detekovaná.

Kvantitatívna metóda sa v podstate líši v štúdii podľa jej úloh a indikácií. Nie všetci pacienti s hepatitídou podstupujú takúto analýzu. Ako každý iný má konkrétne ciele. Určuje sa vírusová záťaž alebo kvantitatívna analýza PCR na RNA vírusu:

• určiť RNA vírusu v krvi a diagnózu "vírusovej hepatitídy";
• predpovedať chronickú hepatitídu a priebeh ochorenia;
• na monitorovanie antivírusovej liečby a rozhodovanie o tom, či sa má predĺžiť, znížiť alebo zmeniť taktiku liečby.

Štúdia sa vykonáva, ak existujú takéto indikácie:

• hepatitída C sa zistí v kvalitatívnom výskume a protilátky sa nachádzajú v krvi;
• so zmiešanou hepatitídou;
• ak je plánovaná antivírusová terapia;
• počas a po liečbe hepatitídy C;
• v prítomnosti chronickej a akútnej hepatitídy C.

Test sa vykoná na odhad počtu jednotiek vírusu v danom objeme vzorky krvi 1 cm3 alebo 1 ml. Výsledky sú uvedené na obrázkoch. Indexy sa používajú: IU / ml, čo znamená medzinárodnú jednotku na mililiter a kópie na ml, počet kópií RNA v 1 ml vzorke. Čím vyšší je kvantitatívny indikátor analýzy, tým väčšia je pravdepodobnosť prenosu vírusu na inú osobu.

P-DNA je spôsob rozvetvenej DNA. Jednoduchšia a lacnejšia metóda. Používa sa pre viac vzoriek, má nízku citlivosť od 500 IU / ml. S takou citlivosťou je možné detekovať vírus, aj keď je prítomný v krvi.

TMA je spôsob transkripčnej amplifikácie. Táto technika odhaľuje nukleové kyseliny v krvi. Má nízke náklady a pri tej istej vysokej citlivosti od 5 do 10 IU / ml. Relatívne nová technika, ktorá umožňuje urýchliť a znížiť náklady na testovanie.

Výsledky kvantitatívnej analýzy stanovenia vírusu RNA predloženej laboratóriom sa interpretujú takto:

Čo je PCR analýza a vírusová záťaž?

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) je laboratórna metóda na stanovenie DNA a RNA. Po prvýkrát to bolo testované takmer pred pol storočím americkou Cary Mullisovou. Tento hypersenzitívny test je schopný určiť nosič genómu z jednej zdrojovej molekuly obsiahnutej v krvi, slinách alebo pokožke.

Metóda PCR má veľké vyhliadky, nachádza sa nielen v medicíne, ale aj v genetickom inžinierstve av kriminalistike. Pomocou klonov a vytvorením nových typov DNA určite stupeň príbuzenstva. Na kus epitelu nájdený na mieste činu, zriadiť zločinu.

Analýza PCR pre hepatitídu - čo to je a prečo to robí?

Prečo je potrebná PCR analýza pre podozrenie na hepatitídu C, čo to je?

Vírus hepatitídy C - RNA obsahujúci vírus, má 6 genotypov a až 500 subtypov. Zo všetkých hepatitídy má tento vírus najvyššiu schopnosť mutácie a prekonáva ochrannú bariéru imunitného systému. Z celkového počtu prípadov hepatitídy spôsobil vírus C 70% chronických prípadov a 30% cirhózy a rakoviny pečene.

Podstata metódy: časť vyšetrovaného génu pomocou špeciálnych enzýmov a podmienok je nútená reprodukovať v skúmavke. PCR analýza umožňuje určiť kmeň vírusu, bez ktorého nie je možné vykonať účinnú liečbu: každý genotyp je inak citlivý na antivírusové lieky. Existujú dva typy PCR:

Antivírusová terapia potrebuje konštantné monitorovanie, aby sa liečba napravila včas, pre tieto účely sa tiež používa polymerázová reťazová reakcia.

Kvalitatívna a kvantitatívna PCR

PCR kvalitatívne na hepatitíde C dáva odpoveď: existuje kmeň vírusu C v pacientovej krvi a ktorý z nich. Genotypizácia je nevyhnutná na objasnenie diagnózy, prognózy ochorenia a určenie načasovania liečby.

Podľa prijatej klasifikácie je gén označený číslom a podtyp je označený malým latinským písmom.

Špeciálna droga založená na prírodných látkach

Cena drogy

Spätná väzba na liečbu

Prvé výsledky sa prejavujú po týždni užívania

Viac o príprave

Len jedenkrát denne, 3 kvapky každý

Návod na použitie

Dekódovanie tabuľky genotypov vírusu C:

• Genotyp la, lb, lc
• Genotyp 2a, 2b, 2c, 2d
• Genotyp 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f
• Genotyp 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4i, 4j
• Genotyp 5 a
• Genotyp 6 a

Najbežnejšie genotypy sú 1,2,3. V Rusku sa kmeňov 1a, 1b, 2 a 3 vírusu C.

Genotyp 1b ťažšie iné liečiteľné vo výške 90% sa stáva chronickou, z ktorých 30% je premenený rakovinou alebo cirhózou.

Genotypy 2a a 3a majú stupeň chronizácie 33-50%, sú citlivejšie na antivírusovú liečbu.

Pri potvrdení prítomnosti vírusu sa kvantifikuje PCR pre hepatitídu C, ktorá vypočítava počet molekúl RNA v laboratórnej vzorke pacienta.

Vysvetlenie analýzy

Kvalitatívna PCR analýza má dve odpovede:

PCR negatívne znamená, že patogén v krvných vzorkách nie je detegovaný.
pozitívne odpoveď naznačuje opak: RNA jedného alebo iného genotypu vírusu S.

Pravdepodobnosť spoľahlivosti výsledku je 95%. Zvyšných 5% je chybou v dôsledku chyby osoby. Táto možnosť je povolená kvôli vysokým požiadavkám na realizáciu výskumu:

• pravidlá skladovania činidiel;
• príslušná kvalifikácia zdravotníckeho personálu;
• čistota biomateriálu.

Súprava PCR samotná má 100% diagnostickú presnosť.

Kvantitatívna PCR RNA hepatitídy C vám umožňuje určiť vírusovú záťaž v tele pacienta. Používanie:

• určuje sa štádium choroby (akútna, chronická);
• je stanovená účinnosť antivírusovej liečby;
• potreba biopsie pečene je objasnená.

V niektorých prípadoch pacient necíti žiadne známky ochorenia, zatiaľ čo metóda PCR ukazuje infekciu HCV. To znamená, že ochorenie je v počiatočnom štádiu vývoja alebo v chronickej forme. Na objasnenie diagnózy je potrebný ďalší výskum, aby sa antivírusová liečba začala čo najskôr.

Vírusová záťaž pri hepatitíde C

Vírusové zaťaženie ukazuje aktivitu vírusu pečene, ako aktívne dochádza k jeho reprodukcii.

Čo to je?

Kvantitatívne PCR hepatitídy C je meraná v medzinárodných jednotkách na 1 ml alebo IU / ml, čo ukazuje, koľko študoval v 1 ml krvi detekovaná RNA kópií určitého vírusu kmeňa S.

Čo sa považuje za vysoké, čo nízke?

Analýza vírusovej záťaže umožňuje určiť prítomnosť vírusovej RNA v koncentrácii 50 IU / ml. Vírusová záťaž je normálna - to je prípad, keď pomocou PCR nie je detegovaná žiadna molekula HCV RNA.

Vírusová záťažová tabuľka:

• nízka koncentrácia od 600 IU / ml 3 x 104 IU / ml;
• priemerná koncentrácia od 3 * 104 IU / ml do 8 * 105Mm;
• Vysoká - hladina vyššia ako 8 * 105 IU / ml.

Nízka vírusová záťaž - to je signál, že terapeutická liečba je správne zvolená a prognóza na liečbu hepatitídy C je priaznivá.

Vysoká koncentrácia vírusových buniek že ochorenie je v akútnej fáze. Krv pacienta je nebezpečným zdrojom infekcie.

Vírusové ukazovatele zaťaženia, ktoré sú na priemernej úrovni, vyznačujúci sa chronickom štádiu pitnej vody, alebo môžu byť dve trendy vývoja: jeho zvýšenie, alebo zníženie.

Na konci sa uskutoční kontrolná PCR v 6 mesiacoch.

Náklady na diagnostiku PCR

Nasledujúce príznaky by mali byť dôvodom na obavy:

• všeobecná slabosť;
• zmena farby kože, očná skleróza, výtok;
• nevoľnosť;
• znížená chuť do jedla;
• bolesť svalov a kĺbov;
• ťažkosť v správnom hypochondriu;
• zvýšené hladiny AST a ALT v krvi.

Pri kontakte s infikovanými pacientmi sa počas predoperačného obdobia odporúča aj hemodialýza na vyšetrenie.

Verejné klinické pracoviská vykonávajú krvný test na PCR bez poplatku, ak sa k nemu hlási odborník na infekčnú chorobu alebo hepatológ.

Platené služby pre diagnostiku PCR sa poskytujú vo všetkých hlavných ruských mestách. Náklady závisia od typu testu, dostupného vybavenia, načasovania a ďalších faktorov.

Kvalitatívne analýzy PCR v Moskve a Petrohrade budú stáť od 600 do 900 rubľov. V regiónoch - od 300 do 800 rubľov.

Definícia vírusovej záťaže hepatitídy C bude stáť 17 000 až 22 000 rubľov. Pri iných typoch infekcií je cena kvantitatívnej štúdie 1200 až 100 000 rubov.

Výhody a nevýhody metódy PCR

Aké sú výhody metódy polymerázovej reťazovej reakcie v porovnaní s inými diagnostickými metódami?

1. Široká škála aplikácií. Pomocou PCR pomocou štandardného zariadenia môžete identifikovať akýkoľvek vírus.
2. Presnosť detekcie patogénov. Použitím rôznych kombinácií enzýmov a analytických techník sa dosiahne 100% špecifikácia štúdie pre indikovanú infekciu.
3. Vysoká citlivosť. Táto technika umožňuje detegovať prítomnosť jednej molekuly vírusu v krvi.
4. efektívnosť. Kvalitatívna analýza je pripravená za niekoľko hodín, kvantitatívne - po dvoch dňoch.
5. Diagnóza vírusu v inkubačnej dobe. Pri PCR nie je patogén určený prítomnosťou protilátok, keď už existuje imunitná odpoveď tela, ale pred začiatkom patologického procesu, čo uľahčuje liečbu.

Nevýhody PCR sú dôsledkom jej výhod:

• Čistota testu vyžaduje najvyšší stupeň čistoty, vrátane vzduchu v laboratóriu, aby sa do vzorky nedostala "cudzia" DNA;
• vysokými požiadavkami na zamestnancov, uskutočňovanie odberu vzoriek a analýzu biomateriálu.

Analýza PCR pre hepatitídu C

Diagnóza hepatitídy zahŕňa celý komplex testov na určenie prítomnosti vírusu v krvi. Jedným zo spôsobov, ako zistiť ochorenie, je metóda PCR ako reakcia na hepatitídu C. Čo je to dôvod, prečo je PCR analýza hepatitídy taká dôležitá, ako sa vykonáva a dekóduje?

Čo je to?

Polymerázová reťazová reakcia alebo PCR sa používa na diagnostiku žalúdočných vredov, kolitídy, enteritidy. Jeho hlavnou výhodou je, že pomáha detegovať v tele samotný samotný vírus hepatitídy C a protilátky proti nemu, ktoré majú schopnosť spôsobiť, že imunitný systém nereaguje kvôli svojej schopnosti mutovať.

Štúdiou a jej podstatou je vytvoriť určité podmienky, v ktorých dochádza k reakcii reťazca hepatitídy RNA. Ak sa v porovnaní s nukleotidovou sekvenciou vírusu hepatitídy C zistí náhoda, znamená to, že v krvi sú vírusové častice a rozpad sa vyskytuje v pečeni. Ak je množstvo vírusu pod určitou úrovňou, urobí sa negatívna diagnóza, ak je vyššia - pozitívna.

Existujú dva typy krvných testov s použitím metódy PCR na hepatitídu: kvantitatívna analýza a kvalitatívna analýza.

Kvantitatívna PCR, ako je uvedené vyššie, určuje koncentráciu RNA vírusu hepatitídy. Okrem toho je schopný poskytnúť informácie o intenzite, s akou sa patológia vyvíja a o účinnosti predpísanej liečby. Kvantitatívna analýza hepatitídy C je mimoriadne dôležitá, pretože stanovuje odolnosť voči antivírusovým liekom a umožňuje upraviť liečbu.

Po ukončení liečby pacientom pomáha PCR pri určovaní ďalšieho poradia predpisov. V niektorých prípadoch sú potrebné ďalšie prieskumy. Napríklad, ak je hladina ALP zvýšená (ale nie viac ako 2 krát za pol roka) a analýza indikuje vírusové zaťaženie nad 105 IU / ml, pacientovi bola pridelená biopsia. Ak kvantitatívna analýza PCR zistí silný zápal a fibrózu, pacientovi sa predpíše liečebný postup s antivírusovými liekmi.

V situáciách, v ktorých je veľký počet vírusových častíc kombinovaných s vysokým ALT, musí byť pacient okamžite liečený bez ďalších diagnostických opatrení.

Vykonajte tento test a zistite, či máte problémy s pečeňou.

Kvalitatívnu interpretáciu ukazovateľov kvantitatívnej analýzy krvi na hepatitídu môžu kvalifikovaní a skúsení odborníci a moderná technológia to pomáha pri nízkych koncentráciách vírusu v krvi.

Kvalitatívna PCR analýza je zameraná na určenie a potvrdenie skutočnej prítomnosti vírusu v tele. Vykonáva sa s detekciou protilátok proti hepatitíde v krvi. Ide o kvalitatívne test na hepatitídu zaručiť presnosť výsledku o 100% a umožňuje diagnostikovať v skorých štádiách ochorenia, čo umožňuje bojovať proti hepatitíde B počas prvých týždňov po infekcii a zvyšuje šance na úplné vyliečenie (v prípade ochorenia typu B).

Výhody PCR

Pri skúmaní metódy PCR a dešifrovaní krvného testu na hepatitídu je tiež možné určiť genotyp pôvodcu ochorenia. Existuje 6 genotypov vírusu a veľké množstvo podtypov, ale v našom regióne je distribúcia 1, 2 a 3 genotypov.

Ďalšie výhody tohto typu diagnostiky sú:

• Vysoká presnosť prijatých indikátorov a nízka pravdepodobnosť chýb v nich;
• vysoká citlivosť na vírusové častice v krvi;
• možnosť detekcie viacerých patogénov;
• diagnostika patogénnych intracelulárnych mikroorganizmov, ktoré majú vysokú antigénnu variabilitu;
• práca s dekódovaním analýzy hepatitídy umožňuje zistiť latentné prúdové infekcie.

Komu vymenúva

Analýza PCR pre hepatitídu nutne zahŕňa nasledujúce kategórie ľudí:

• tehotné ženy;
• zamestnanci zdravotníckych zariadení;
• potenciálnych darcov krvi a orgánov;
• tých, ktorí majú charakteristické príznaky choroby;
• HIV-infikované osoby;
• drogovo závislých;
• osoby vedúce promiskuitný sexuálny život.

Ako sa vykonáva analýza a vyžaduje sa odborná príprava?

Vzorky krvi na PCR sa vykonávajú z žily. Zvyčajne to nastane ráno, kým osoba jedla, pretože po jedení musí prejsť minimálne 8 hodín. V extrémnych prípadoch môže byť krv odobratá na vyšetrenie denne alebo večer, ale časová medzera medzi analýzou a príjmom potravy by mala byť aspoň 5 hodín.

Ľudský faktor sa môže vo výsledkoch kvantitatívne odzrkadliť: ich presnosť sa v niektorých prípadoch znižuje zo 100% na 95%, preto je nevyhnutné pripraviť na dodávku krvi vopred. Kvalita biomateriálu na analýzu bude vhodná, ak pacient dodržia tieto pravidlá:

• Pred dávaním krvi môžete piť len čistú vodu;
• počas dvoch dní predtým, ako by sa štúdie odmietla prijímať vyprážané a mastné potraviny, ako aj alkoholické nápoje;
• deň pred návštevou laboratória prestať užívať lieky. V prípade, že to nie je možné, je absolútne nevyhnutné upozorniť ošetrujúceho lekára a ošetrujúceho lekára;
• v predvečer stresových situácií a fyzickej námahy;
• Neprechádzajte pomocou ultrazvukových, rádiologických a inštrumentálnych štúdií krátko pred odberom krvi;
• hodina pred analýzou by sa mala zdržať fajčenia;
• 20 minút pred dodaním krvi treba rozptýliť, uvoľniť a dokonca dýchať.

Ak test vykoná dieťa mladšie ako 5 rokov, rodičia by mali zabezpečiť, aby pili varenú vodu každých 10 minút počas pol hodiny pred odberom vzoriek biomateriálu.

Vysvetlenie prijatých údajov

Analýzu možno prezentovať slovom (v prípade kvalitatívneho výskumu), napríklad "nenájdený" alebo "pod rozsahom zmien". V prvom prípade to znamená, že infekcia nebola zistená. V druhej - že je prítomný vírus, ale v malom množstve. Táto situácia si vyžaduje opätovné preskúmanie.

Vírusová záťaž je určená množstvom infekčnej RNA a je označená ako ME / ml alebo kópie / ml.

Normálny ukazovateľ (norma) kvantitatívnej analýzy hepatitídy C je rozsah od 1,8 x 102 do 2,4 x 107 IU / ml.

Koncentrácia vírusu v krvi môže byť:

• nízka: od 600 IU / ml do 3x104 / ml;
• priemer: od 3x10 4 IU / ml do 8x10 5 IU / ml;
• vysoká: viac ako 8x10 5 IU / ml.

Kvantitatívna a kvalitatívna analýza PCR pre hepatitídu umožňuje určiť prítomnosť vírusu v tele a úroveň jej koncentrácie. Polydizovaná reťazová reakcia je schopná diagnostikovať ochorenie už v počiatočnom štádiu, ale na to je potrebné, aby pacienti čo najskôr kontaktovali lekárske inštitúcie o pomoc a prísne dodržiavali odporúčania lekára.

Kvantitatívna analýza PCR pre hepatitídu C

Existuje mnoho subtypov HCV, preto nie je vždy možné vybrať účinné antivírusové lieky a dosiahnuť požadované výsledky liečby. Rozmanitosť patogénov je spôsobená ich schopnosťou meniť ich štruktúru, to znamená mutovať. Výsledkom je, že imunita nemá čas na vytvorenie silnej reakcie proti patogénnemu činidlu a lieky sú neúčinné.

Často sa diagnostikuje hepatitída v štádiu cirhózy, ktorá predisponuje neskoršiu detekciu ochorenia v dôsledku nedostatku klinických príznakov. Iba laboratórne testovanie dokáže detekovať HCV v inkubačnej dobe.

Kvantitatívna analýza hepatitídy C umožňuje nielen stanovenie prítomnosti patogénu v krvi, ale aj výpočet jeho koncentrácie.

Odporúčania na prípravu analýzy

Nevyžaduje sa špecifická príprava na laboratórnu diagnostiku. Stačí stačiť nasledovné odporúčania:

1. kvantitatívna analýza sa vykonáva prázdnym žalúdkom s posledným jedlom 8 hodín pred krvou;
2. na dva dni by mal byť opustený alkohol a "ťažké" jedlá;
3. Lieky, ktoré pacient užíva, majú mimoriadny význam. Môžu ovplyvniť výsledok štúdie, takže o nich by mal lekár vedieť.

Aj ťažké fyzické námahy a fyzioterapeutické postupy v predvečer odberu krvi nie sú žiaduce. Kvôli dešifrovaniu kvantitatívnej analýzy hepatitídy C sa ukázalo ako spoľahlivé, nezanedbajte vyššie uvedené odporúčania.

Často pacient dostane výsledok analýzy za deň. Cena testu na určenie koncentrácie patogénu v krvi závisí od laboratória a kvality činidiel a môže dosiahnuť 4 000 rubľov.

Laboratórna diagnostika hepatitídy C

Medzi primárne diagnostické metódy patrí test ELISA alebo inak imunosorbentný test enzýmov. Je určená na detekciu špecifických protilátok proti HCV. Jeho účinnosť dosahuje 95%. Ak prepis štúdie prináša pozitívny výsledok, stojí za to podozrenie na prítomnosť činidla v krvi.

Treba poznamenať, že polovica testovaných jedincov s "+" testom v priebehu ďalšej diagnostiky nezaznamenáva vírusovú látku v krvi. Test ELISA v tomto prípade indikuje predchádzajúci kontakt s HCV v minulosti, čo je potvrdené cirkulujúcimi protilátkami.

Presnejšou štúdiou je polymerázová reťazová reakcia alebo PCR. Umožňuje určiť koncentráciu RNA patogénu v krvi. Po objavení genetického súboru vírusu v biologickom materiáli doktor potvrdí hepatitídu C.

PCR je priradená pacientovi na overenie diagnózy. Umožňuje identifikovať RNA v štádiu, keď protilátky ešte nie sú k dispozícii. Existuje niekoľko typov genetických štúdií:

1. kvantitatívna analýza PCR pre hepatitídu C, ktorá nielen stanovuje prítomnosť patogénu v krvi, ale poskytuje aj informácie o jeho koncentrácii;
2. kvalita - potvrdzuje infekciu;
3. genotypizácia - umožňuje určiť genotyp patogénneho agens a vybrať najúčinnejšie lieky proti nemu.

Polymerázová reťazová reakcia

Ako už bolo uvedené, existuje niekoľko typov laboratórneho výskumu:

• kvalitatívna analýza - indikuje prítomnosť patogénneho činidla v krvi. Tento typ diagnózy má určitú "úroveň odpovede", takže nie je vždy spoľahlivý. Na správne dešifrovanie výsledkov a získanie skutočných indikátorov sa odporúča použiť testovací systém s citlivosťou najmenej 50 IU / ml pre štúdiu. Normou analýzy je "negatívna odpoveď" alebo "vírus nie je detegovaný." To naznačuje nedostatok genetického súboru patogénov v testovacom materiáli. Ak bol výsledok pozitívny, vyžaduje sa ďalšie vyšetrenie pacienta;
• kvantitatívna analýza PCR pre hepatitídu C určuje vírusovú záťaž, teda koncentráciu patogénneho činidla v krvi. Výsledok štúdie ukazuje počet RNA jednotiek v pevnom objeme biologickej tekutiny;

Vírusová záťaž je počet infekčných RNA v jednom mililitroch krvi výskumníka. Jednotky merania sú ME / ml, ale niektoré laboratóriá určujú "kópie / ml", zatiaľ čo označujú vzorku analytického štandardu na porovnanie a vyhodnotenie výsledkov.

• genotypu. Vzhľadom na schopnosť patogénu meniť výber účinných antivírusových liekov na terapiu by mal byť založený na jeho genotype. Závisí to nielen na výsledku, ale aj na trvaní liečby. Takže HCV 1 hepatitída vyžaduje lieky na jeden rok, ale iba 60% prípadov vykazuje pozitívnu dynamiku. Pokiaľ ide o druhý a tretí genotyp, sú menej rezistentné voči účinku antivírusových činidiel, a preto účinnosť liečby presahuje 85%. Pri získaní takéhoto výsledku výskumu - "vírus nie je napísaný", stojí za to pochybovať o prítomnosti činidla, ktoré nie je rozpoznané štandardnými testovacími systémami.

Indikácie pre analýzu

Výklad kvantitatívnej analýzy hepatitídy C je potrebný na:

1. ďalšie vyšetrenie pacienta, keď boli pomocou ELISA detegované protilátky proti HCV;
2. potvrdenie diagnózy;
3. stanovenie vírusovej záťaže v prípade zmiešanej infekcie, keď je osoba nakazená niekoľkými druhmi patogénov;
4. určenie taktiky liečby (výber antivírusových liekov, ich náhrada alebo ukončenie terapie);
5. posúdiť dynamiku progresie ochorenia, ako aj účinnosť liekov;
6. stanovenie štádia patológie (akútna, chronická).

PCR má nasledujúce výhody:

1. dobrá citlivosť, vďaka čomu je možné počítať aj malé množstvo vírusu;
2. stanovenie samotného patogénu (RNA), nie antigénov;
3. špecifičnosť techniky - vytvorenie špecifického typu patogénneho činidla;
4. rýchlosť získania výsledkov, pretože pre analýzu nevyžaduje kultiváciu plodín na živnom médiu. Odpoveď je pripravená za 5 hodín;
5. univerzálnosť - umožňuje identifikovať genetickú sadu rôznych patogénov, a to ako RNA, tak DNA (hepatitída B);
6. detekcia latentnej infekcie.

Laboratórny test pomáha potvrdiť diagnózu a je neoddeliteľnou súčasťou komplexného vyšetrenia (analýza klinických symptómov, výsledky ELISA a biochémie).

Okrem toho sa PCR bežne používa v oblasti alergológie, genetiky, ako aj na určenie skutočnosti otcovstva.

Dekódovanie kvantitatívnej analýzy vírusu hepatitídy C

Hodnotenie výsledkov laboratórnej diagnostiky vykonáva lekár porovnaním získaných údajov s normou.

Použitie diagnostiky PCR

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) v molekulárnej biológii sa nazýva experimentálna metóda detekcie vírusov. Umožňuje významne zvýšiť koncentráciu určitých fragmentov nukleovej kyseliny (DNA) vo vzorkách biologického materiálu, čo umožňuje určiť (rozpoznať) a spočítať ich.

Analýza sa uskutočňuje nasledovne. Genetický materiál (vzorka krvi), ktorý potenciálne môže obsahovať požadovaný gén, sa zavedie do skúmavky. Aj tam sú umiestnené priméry - chemicky syntetizované malé dĺžky požadovaného génu.

Do nádoby sa tiež pridá DNA alebo RNA polymeráza, je schopná vytvoriť reťazec nukleovej kyseliny, ktorý je úplne identický s pôvodným reťazcom. Súbor štyroch voľných nukleotidov, špeciálny stavebný materiál pre RNA alebo DNA, z ktorých jedna obsahuje rádioaktívne častice fosforu, sa tiež zavádza do výslednej kompozície.

Výsledná zmes sa zahreje na 95 až 96 ° C, kvôli ktorému sa rozdelia obidve DNA helixy, ktoré sa previažu v bežnom stave. Potom sa prípravok ochladí, v tomto čase sa priméry pripojí k požadovanej oblasti vírusového genómu, bez toho, aby RNA (alebo DNA) opäť vytvorila dvojitú špirálu.

Počas chladenia polymeráza vyhľadáva voľný reťazec nukleotidov. Pre fungovanie tohto enzýmu je potrebný jeden reťazec nukleotidov. Pretože polymeráza klesá pozdĺž reťazca DNA (ako krúžok lano), nemôže fungovať na dvojitej špirále.

Potom sa uskutočňuje opakovaný cyklus zahrievania, kvôli ktorému sú nukleotidové reťazce oddelené. Pri každom z týchto cyklov PCR sa množstvo požadovaného génu pre hepatitídu vo vzorke zvyšuje v geometrickej progresii a zvyšok genetického materiálu sa produkuje lineárne.

Po purifikácii roztoku nukleotidových zvyškov a oddelení reťazcov DNA parametrom molekulovej hmotnosti od elektroforézy je ľahké určiť, či požadovaný gén existuje v testovanej vzorke alebo nie.

Výhody PCR

Laboratórna štúdia používajúca metódu PCR umožňuje získať ešte viac informácií ako len prítomnosť RNA vírusu. Pri určovaní parametra úrovne rádioaktívneho žiarenia je možné určiť, aké množstvo genetického materiálu bolo na začiatku obsiahnuté v skúmanej vzorke. V prípade hepatitídy určte úroveň vírusovej záťaže.

Ďalšou výhodou tejto metódy je veľmi vysoká citlivosť CR reakcie. Je oveľa vyššia ako klasické metódy na detekciu vírusov. V ideálnom prípade, aby sa identifikoval požadovaný gén, stačí iba jeden vírus vo vzorke na PCR.

Okrem toho je PCR úplne špecifická. Jeho priméry sú vytvorené tak, aby úplne zodpovedali jedinečným častiam požadovaných génov, ktoré žiadna iná sekvencia nemá. Oba odtlačky prstov sú jedinečné a v každom géne existujú jedinečné sekvencie nukleotidov.

Kvalitatívna analýza PCR

Kvalitatívna analýza odhaľuje iba prítomnosť vírusu v krvi. Tento test sa má vykonať u všetkých pacientov, u ktorých sa zistilo, že majú v krvi protilátky na hepatitídu C. Výsledok môže byť len jedna z dvoch hodnôt: "zistená" alebo "nezistená". U zdravého človeka by norma (referenčná hodnota) mala byť "nezistená".

Existuje aj špeciálna interpretácia takýchto výsledkov uskutočneného kvalitatívneho výskumu:

• Výsledok je "objavený". To znamená, že vo vzorke biologického materiálu, s ktorým bolo nájdené RNA fragmentu, ktorý je špecifický pre vírusu hepatitídy C V dôsledku toho je skutočnosť, že u pacienta s infekciu vírusom hepatitídy B s C-je výsledok kvalitatívnej PCR je "objavil", znamená to, že vírus opakovanie a v tomto čase infikuje nové pečeňové bunky v tele.
• Výsledok je "nezistil". Takéto rozhodnutie ukazuje, že vo vzorke biologického materiálu získaný fragment RNA nie je v laboratóriu, ktorá je špecifická pre HCV RNA buď rovnakej koncentrácii patogénu infekcie vo vzorke bola pod hranicou citlivosti testu detekovaný.

V akútnej fáze RNA vírusu hepatitídy C sa môžu kvalitatívne štúdie s použitím PCR techniky odhaliť po 1-2 týždňoch bezprostredne po infekcii tela, tj dlho pred vznikom protilátok proti samotnej hepatitíde.

Nespoľahlivé výsledky analýz takéhoto vyšetrovania je možné získať s:

• kontaminovaný biomateriál;
• prítomnosť heparínu v krvi pacienta;
• prítomnosť vo vzorke chemických alebo bielkovinových látok (inhibítorov), ktoré ovplyvňujú rôzne zložky PCR.

Pre kvalitatívnu analýzu PCR nie je potrebná špeciálna príprava pacienta na štúdium. Venózna krv sa používa ako materiál.

Hodnotenie výsledkov

Kvalitatívne PCR testy majú určitý stupeň citlivosti a v závislosti od presnosti výskumu a úroveň vybavenia v laboratóriu môže kolísať medzi 10 a 500 IU / ml.

To znamená, že ak je vírus vo vzorke krvi prítomný vo veľmi nízkej koncentrácii (menej ako prahová citlivosť daného laboratória), pacienta pacienta sa môže zistiť ako "nezistené". Z tohto dôvodu, pri vykonávaní kvalitatívnu analýzu PCR s nízkou úrovňou virémie (vírus nízka koncentrácia), napríklad u pacientov, ktorí podstúpili liečbu antivírusovej terapie, je dôležité poznať, a prah citlivosti diagnostického systému.

Varianty diagnostických systémov

Na kontrolu virologickej odpovede sa odporúča používať antivírusovú liečbu na použitie diagnostických systémov s prahom citlivosti najmenej 50 IU / ml. Tieto kritériá sú splnené, napríklad: analyzátory COBAS Ampicolor HCV test (c presnosť 50 IU / ml) a RealBest HCV RNA (s citlivosťou 15 IU / ml).

Podľa odporúčaní WHO pre vytvorenie konečnej diagnóze hepatitídy C, musí byť založené iba na základe trojitého detekcie RNA vírusu vo vzorkách séra od pacienta so žiadnymi inými druhmi hepatitídy markeru.

Okrem metód PCR sa na odhaľovanie HCV RNA u pacientov používa štúdia TMA (metóda transkripčnej amplifikácie). Má najvyššiu hranicu citlivosti (5-10 IU / ml), ale v našej krajine táto metóda testovania ešte nie je veľmi obvyklá.

Rozsah zistených zmien vírusov

Toto kvalitatívne stanovenie prítomnosti RNA vírusu hepatitídy C v sére umožňuje určiť niekoľko genotypov tohto vírusu. V súčasnej dobe veda vie viac ako šesť genotypov tohto vírusu, rovnako ako asi 10 subtypov choroby.

Vírusy s 1, 2, 3 genotypmi sú v našej krajine bežné. Laboratóriá môžu identifikovať nasledujúce genotypy: 1a a 1b, 2a, 2b a 2c, a 3, 4, 5a a 6 bez ohľadu na podtypy. Pri všetkých vírusových modifikáciách je špecifickosť detekcie 100%.

Kvantitatívna analýza PCR

Pomocou kvantitatívneho PCR testu sa určí koncentrácia vírusu hepatitídy v krvných vzorkách (vírusová záťaž). Tento test virémie (koncentrácia vírusu) vám umožňuje určiť počet jednotiek špecifického genetického materiálu (najviac vírusovej RNA), ktorý sa deteguje v určitej miere. V tomto prípade určte jeho koncentráciu v 1 ml, čo zodpovedá 1 cu. cm.

Kvantitatívne parametre analýzy sú vyjadrené v číslach pre toto použitie ako jednotky merania medzinárodných jednotiek (IU) na mililiter (ml), označené ako ME / ml. Teraz v niektorých laboratóriách možno množstvo vírusu stanoviť v iných jednotkách: počet kópií na ml je označený ako kópie / ml.

• Načasovanie: pre hepatitídu C sa takáto kvantitatívna analýza PCR vykonáva tesne pred začiatkom liečby. Potom na 1., 4., 12. a 24. týždni. Hodnotenie v 12. týždni je orientačné, umožňuje určiť účinnosť terapie.
• Príprava na analýzu. Pri kvantitatívnej analýze PCR sa nevyžaduje špeciálna príprava pacienta na štúdium. Polhodinu pred odberom vzoriek by ste nemali fajčiť. Venózna krv sa používa ako laboratórny materiál.

Hodnotenie výsledkov

V prípade rôznych laboratórnych testovacích systémov existujú pre tento ukazovateľ rôzne konverzné faktory v IU / ml. V priemere sa používa konverzný parameter, v ktorom sú 4 kópie / ml = 1 IU / ml. To znamená, že ak laboratórium dáva výsledok PCR analýzy 2,4 * 10 6 kópií / ml, potom by tento parameter mal byť rozdelený na 4 a dostaneme 6 x 105 5 IU / ml.

Úroveň vysokého zaťaženia 800 000 IU / ml sa považuje za vysokú, čo je približne ekvivalentný indexu 3 000 000 kópií / ml. Nízka virémia podľa niektorých autorov zodpovedá parametrom kvantitatívnej PCR pod 400 000 IU / ml.

V dôsledku kvantitatívneho testu sa konečné výsledky dajú dodať nie vo forme digitálnej hodnoty, ale: "pod meracím rozsahom" alebo "nezistené".

• Vyhodnotenie: "pod meracím rozsahom". To naznačuje, že kvantitatívny test nezaznamenal vírusovú RNA vírusu hepatitídy C, ale samotný vírus je v tele prítomný vo veľmi malých koncentráciách. Toto je indikované dodatočným kvalitatívnym testom, ktorý potvrdzuje prítomnosť vírusu.
• Hodnotenie: "nezistené". Tento výsledok naznačuje, že kvantitatívny test nezistil vírus vo vzorke RNA.

Parameter vírusovej záťaže určuje najprv stupeň infekčnosti choroby, úroveň "infekčnosti" pacienta. Čím vyššia je koncentrácia vírusu pacienta, tým väčšia je pravdepodobnosť jeho prenosu na iné osoby. Napríklad, ak máte sex s chorým človekom, alebo vertikálna cesta. Takýto kvantitatívny indikátor tiež pomáha určiť účinnosť liečby pacienta.

Vykonávanie kvantitatívnej analýzy PCC je dôležité pre antivírusovú liečbu, hodnotenie jej úspechu a plánovanie trvania kurzu. Takže s rýchlou odpoveďou tela na liečbu a nízkym stupňom virémie sa dĺžka liečby môže znížiť.

Pri pomalom znižovaní kvantitatívneho parametra PCR by sa antivírusová liečba mala rozšíriť alebo upraviť. Ak je úroveň vírusovej záťaže nízka, potom je to priaznivý faktor liečby, ak je vysoká, potom je aplikovaná metóda liečby neúčinná a lieky alebo spôsoby ich použitia by sa mali zmeniť.

Kvalitatívna a kvantitatívna analýza PCR pre hepatitídu C: negatívne, pozitívne, dekódovanie

Hepatitída C je vírusové ochorenie pečene spôsobené flavivirusom HCV (z anglického vírusu hepatitídy C), ktorý obsahuje molekulu ribonukleovej kyseliny (RNA). RNA nesie genetický kód vírusu. Jeho prítomnosť umožňuje analýzu PCR pre hepatitídu C.

HCV je nebezpečenstvo pre človeka a to tzv sérologické okno (čas medzi infekciou a vzhľadu reakcie imunitného systému), môže byť dostatočne dlhý - od niekoľkých týždňov do šiestich mesiacov.

Toto neodhalí infekciu a začne liečbu včas.

V závislosti od individuálnych vlastností hostiteľského tela sa môže HCV prejaviť v akútnej forme a môže sa vyvinúť aj ako chronické ochorenie, ktoré si vyžiada dlhodobé a drahé liečenie. Pri detekcii protilátok proti HCV sa vykonáva niekoľko laboratórnych testov vrátane PCR pre hepatitídu C. Tento test sa uskutočňuje pre všetkých ľudí, v ktorých krvi sa našli protilátky proti HCV.

Čo je analýza PCR?

Laboratórna analýza PCR pre hepatitídu C - štúdium biologického materiálu na identifikáciu prítomnosti flavavírusu.

Polymerázová reťazová reakcia (ako skratka je dešifrovaná) ukazuje kvantitatívnu hodnotu vírusového poškodenia organizmu, jeho kvalitatívne charakteristiky a tiež genotyp vírusu obsahujúceho RNA.

Na základe týchto údajov a na základe ďalších analýz sa určuje spôsob a trvanie liečby, ako aj epidemiologický faktor (riziko prenosu na iného nosiča).

Čo je analýza RNA pre hepatitídu C?

Hepatitída C sa tiež nazýva analýza RNA (HCV RNA), pretože nie je známa. Flavavírus obsahuje časticu RNA s viriónovou veľkosťou 30-60 nm. Jednou z charakteristík tohto mikroorganizmu je vysoká tendencia k mutáciám.

Každý z poddruhov (genotypov) vírusu má odlišnú rezistenciu, ktorá spôsobuje rôzne spôsoby liečby a povahu ďalšej prognózy pre pacienta.

Biologický materiál (žilovej krvi) je riešené pôst a zvyčajne testované PCR v reálnom čase (vysoko citlivé v reálnom čase, diagnostika na stanovenie dolnej medze 15 IU / ml za použitia automatického režimu uzatvorený systém).

Existujú aj ďalšie testy, napríklad COBAS AMPLICOR s citlivosťou 50-100 IU / ml. Pri akejkoľvek laboratórnej štúdii je prah citlivosti dôležitý, t.j. schopnosť činidla detegovať minimálnu koncentráciu vírusu v biologickom materiáli.

Druhy analýzy hepatitídy C pomocou metódy PCR

PCR pre hepatitídu C zahŕňa tri dôležité zložky:

• kvalitatívna analýza;
• kvantitatívna analýza;
• genotypu.

Tieto testy môžu určiť povahu virémie, ako aj genetické znaky patogénu. V závislosti od citlivosti diagnostického systému sa test vykoná raz a niekedy sa vykoná druhá skúška s citlivejšou činidlom, ktorá potvrdí alebo spresní výsledky.

Vysoko kvalitná PCR proti hepatitíde C

PCR analýza kvality hepatitídy C je ďalším bežným názvom pre analýzu polymerázovej reťazovej reakcie. Štandardná citlivosť testu, ktorá umožňuje zistiť prítomnosť vírusovej lézie, je v rozmedzí od 10 do 500 IU / ml.

Negatívna analýza PCR pre hepatitídu C ukazuje, že koncentrácia vírusu v krvi pacienta je pod hranicou náchylnosti diagnostického systému.

Ak kvalitatívna PCR poskytla odpoveď "nezistená", potom je pre následnú liečbu dôležité poznať prah citlivosti činidla.

Proteínové frakcie na vírus flava sa objavujú oveľa neskôr.

Kvantitatívna PCR pre hepatitídu C

Kvantitatívna PCR hepatitídy C je indikátorom vírusovej záťaže, ktorá odráža hladinu koncentrácie RNA vírusu FLAV v tele. Toto je ukazovateľ, ktorý ukazuje, koľko fragmentov vírusovej RNA je obsiahnutých na jeden kubický centimeter krvi. PCR hepatitídy výsledkov Kvantitatívne skúška C RNA v konvenčnom systéme sú uvedené v medzinárodných jednotkách na ml (IU / ml), a môžu byť zaznamenané v rôznymi spôsobmi, napríklad - 1,7 ppm alebo 1,700,000 IU / ml.

Kvantitatívna PCR diagnostika hepatitídy C sa podáva pacientom pred začiatkom antivírusovej liečby av 12. týždni liečby na vyhodnotenie výsledkov vybranej metódy boja proti HCV. Vírusová záťaž vám umožňuje identifikovať tri dôležité indikátory ochorenia:

• infekčnosť, t.j. stupeň rizika prenosu vírusu z jedného nosiča na druhý (čím je vyššia koncentrácia flavavírusovej RNA, tým vyššia je pravdepodobnosť infekcie inej osoby, napríklad počas sexuálneho kontaktu);
• metóda a účinnosť liečby;
• trvanie a prognóza antivírusovej terapie (čím vyššie je vírusové zaťaženie, tým dlhšie trvá liečba).

Kvantitatívna PCR diagnostika hepatitídy C závisí od typu laboratórneho testu a prahu jeho citlivosti. Dolná hranica normy sa zvyčajne považuje za až 600 000 IU / ml, priemerná hodnota je v rozmedzí 600 000-700 000 IU / ml. Výsledky z 800 000 IU / ml a vyššie sa považujú za vysoké hladiny vírusu obsahujúceho RNA.

genotypu

Vzhľadom na vysokú mutačnú aktivitu HCV v prírode je dôležité v štádiu testovania určiť, ktorý genotyp vírusu je v krvi pacienta. Celkovo je na planéte zaznamenaných 11 genotypov vírusu hepatitídy C, ktoré zahŕňajú mnoho poddruhov. Na území Ruskej federácie sú 1, 2 a 3 spoločné.

PCR RNA hepatitídy C spolu s genotypizáciou je veľmi dôležitou súčasťou analýzy, pretože umožňuje lekárovi určiť rezistenciu (rezistenciu) vírusu, vybrať vhodné lieky a predpísať priebeh liečby.

Genotypovanie vám tiež umožňuje nepriamo určiť stav pečene. Napríklad genotyp 3 HCV je často sprevádzaný steatózou, v ktorej sa tuk nahromadí v bunkách tela.

Krvný test na PCR pri hepatitíde C by mal poskytnúť číslo, ktoré určuje genotyp. V laboratórnych odpovediach môže byť napísané "nešifrované" - a to znamená, že v ľudskej krvi existuje vírus, ktorý nie je určený skúšobným systémom. To môže naznačovať, že genotyp nie je pre danú geografickú oblasť charakteristický. V tomto prípade je potrebné opätovne prejsť analýzou s vyššou citlivosťou diagnostického systému.

Dekódovanie analýzy PCR pre hepatitídu C

Test na PCR proti hepatitíde C možno kvantifikovať na základe vyššie uvedených údajov. Pri prijímaní výsledkov laboratórnych testov sa zvyčajne uvádzajú tieto údaje:

• "Nájdené" / "nenájdené" (vysoko kvalitná PCR pre hepatitídu C);
• množstvo frakcií obsahujúcich RNA, napríklad 831,680 IU / ml (kvantitatívny PCR test);
• číslo, ktoré určuje HCV genotyp, napríklad - 1, 2, 3, 4;
• názov testu je najčastejšie v reálnom čase.

Najdôležitejšie je pri dešifrovaní PCR analýzy hepatitídy C druhá položka, ktorá ukazuje vírusovú záťaž určujúcu prognózu, spôsob a trvanie liečby.

Ak je analýza PCR pre hepatitídu C negatívna a ELISA pozitívna - čo to znamená?

Na dešifrovanie laboratórnych testov je dôležité kontaktovať špecialistu na hepatológiu alebo infekčnú chorobu, ktorý vysvetlí informácie prijaté v súlade s typom diagnostického systému a prahovou citlivosťou. V lekárskej praxi existuje veľa údajov o krvných testoch, ktoré môžu viesť k zámene osoby bez lekárskej výchovy.

Napríklad, v prípade, že test na HCV PCR negatívne a pozitívne ELISA, môže to znamenať, že v tomto okamihu v krvi pacienta nie je HCV, ale pred tým, než trpel akútnej formy hepatitídy C. Predpokladá sa, že pozitívny-linked ImmunoSorbent assay (ELISA), ukazuje, že v krvi sú produkované protilátky po invázii vírusu v minulosti. V modernej medicínskej praxi sa však analýza ELISA považuje za dostatočne spoľahlivú a často poskytuje atypické výsledky, takže lekári ju používajú ako primárne vyšetrenie. Pri diagnostike ochorenia sa špecialisti riadia presne pomocou PCR testov.

Užitočné video

V nasledujúcom videu je veľmi podrobné a zaujímavé povedať, aký je podstatou metódy PCR, ako sa vykonáva analýza:

záver

Venózna krv sa zvyčajne užíva na analýzu PCR s hepatitídou C. Najčastejšie ide o dvojité odbery biologického materiálu - pre test ELISA a priamo pre test PCR. Pre správne výsledky testov sa vyžaduje súlad s hlavnými pravidlami laboratórneho odberu vzoriek biologického materiálu:

• krv na analýzu sa podáva ráno na prázdny žalúdok;
• medzi jedlom a krvou by mala trvať najmenej 8 hodín;
• Pred vykonaním testu by ste mali tiež vylúčiť alkohol a vyprážané potraviny;
• Počas dňa pred podaním krvi sa musíte vyhnúť vysokej fyzickej námahe.

Výsledky krvného testovania sú zvyčajne pripravené na ďalší deň.

Štúdia PCR pre hepatitídu C: typy, indikácie, transkript

Vírusová hepatitída C je závažné ochorenie, ktoré sa vyskytuje pri poškodení pečene. V ôsmich percentách pacientov prechádza do chronickej formy. Vírus sa množí v pečeňových bunkách - hepatocytoch - a spôsobuje ich smrť. Mŕtve tkanivo sa nahradí ložiskami spojivového tkaniva, vyvíja sa fibróza.

S rozvojom fibrózy pečene, je schopný plniť svoju funkciu, začína cirhóza, čo je nebezpečné pre jeho komplikácií: zvyšujúci sa tlak v portálnej žile, gastrointestinálne krvácanie, poruchy zrážanlivosti krvi, mentálne zmeny kvôli poškodeniu mozgu jadra toxických produktov.

Príčinou tohto ochorenia je infekcia vírusom z rodiny Flaviviridae, čo je typ vírusu RNA. To znamená, že genetický materiál, pomocou ktorého sú syntetizované proteíny patogénu, je kódovaný molekulou kyseliny ribonukleovej. Infekcia sa prejavuje krvou, sexuálne a od tehotnej ženy až po plod. Bohužiaľ, medzi infekciou a začiatkom produkcie protilátok môže prejsť pomerne veľké množstvo času - od dvoch týždňov až po šesť mesiacov. To neumožňuje určiť infekciu metódou enzýmovej imunoanalýzy a začať liečbu v počiatočných štádiách.

Čo je analýza PCR?

PCR je metóda molekulárnej analýzy, ktorá umožňuje detekciu genetického materiálu patogénu už v prvom týždni po infekcii použitím polymerázovej reťazovej reakcie. Štúdia má vysokú špecifickosť, presnosť a umožňuje nielen určiť prítomnosť alebo neprítomnosť vírusu, ale aj jeho koncentráciu a genotyp.

Pre túto štúdiu vezmite pacientovu krv, v ktorej sa môže potenciálne nájsť RNA vírusu. V krvi sa pridajú priméry - umelo syntetizované časti požadovaného génu malej dĺžky a RNA polymeráza je špeciálnym enzýmom, ktorý znásobuje množstvo genetického materiálu patogénu. Pomocou špeciálneho zariadenia sa vykonáva niekoľko cyklov vykurovania a chladenia. Materiál sa potom analyzuje a porovná so známymi vírusovými génmi, na základe ktorých sa dospelo k záveru o prítomnosti alebo neprítomnosti infekcie.

Typy PCR analýzy pre hepatitídu C

Existujú tri typy analýzy PCR:

1. Kvalitatívna analýza PCR. Prvá fáza štúdie. Umožňuje vám identifikovať genetický materiál vírusu v krvi.

Indikácie pre analýzu PCR pre hepatitídu C

Štúdia PCR je predpísaná v nasledujúcich prípadoch:

• kontakt s chorým, čo by mohlo viesť k infekcii;
• pozitívna enzýmová imunoanalýza;
• príznaky cirhózy pečene: zmeny veľkosti pečene, zväčšená slezina, výskyt podkožného venózneho plexu na bruchu;
• výskyt príznakov poškodenia pečene: bolesť na pravej strane brucha, žltnutie kože;
• zvýšená aktivita ALT a AST v biochemickej analýze krvi;
• pred začiatkom liečby na určenie vírusovej záťaže;
• sledovať účinnosť antivírusovej liečby;
• po dokončení liečby na monitorovanie relapsu;
• v prítomnosti diagnostikovanej hepatitídy B, aby sa vylúčilo zmiešané poškodenie pečene.

Dekódovanie štúdie PCR pre hepatitídu C

Dekódovanie analýzy PCR a enzýmovej imunoanalýzy pre hepatitídu C by mal riešiť špecialista na hepatológiu alebo infekčnú chorobu. Analýza výsledkov PCR je potrebná v kombinácii s biochemickým krvným testom, biopsiou a ultrazvukom. Iba kvalifikovaný lekár bude schopný analyzovať výsledky štúdií a na základe nich predpísať správnu liečbu.

Dekódovanie kvalitatívnej analýzy.

Genetický materiál patogénu sa našiel v analyzovanom biologickom materiáli. Infekcia je potvrdená.

Neexistuje žiadna infekcia alebo množstvo RNA patogénu je pod hranicou citlivosti.

Dekódovanie kvantitatívnej analýzy.

Normálna postava pre zdravých ľudí. Znamená to, že v testovanom materiáli nie je prítomná RNA hepatitídy C alebo jej koncentrácia je pod hranicou citlivosti v štúdii.

Koncentrácia RNA je pod rozsahom kvantifikácie. Takéto výsledky sú interpretované veľmi opatrne, korelujú ich s údajmi z iných štúdií a často vykonávajú druhú štúdiu.

Úroveň vírusovej záťaže pri danej koncentrácii sa považuje za nízku. Zvyčajne zníženie množstva vírusu znamená, že terapia je úspešná.

Viac ako 8 * 10 ^ 5 IU / ml

Úroveň vírusovej záťaže pri danej koncentrácii sa považuje za vysokú.

Viac ako 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

Množstvo RNA je nad hornou hranicou rozsahu kvantifikácie. Nie je možné vyvodiť závery o stupni vírusovej záťaže s týmto výsledkom. Zvyčajne sa v takýchto prípadoch opakuje test s riedením vzorky krvi.

Dekódovanie genotypizácie.

Bola detegovaná RNA špecifického genotypu

V biomateriáli sa deteguje vírus hepatitídy C špecifického genotypu a podtypu. Výsledok je kódovaný rímskymi číslicami a latinkami, napríklad - 1a, 2b. Existuje sedem genotypov a šesťdesiat sedem podtypov, avšak v Rusku existujú iba tri prvé typy.

Bola detegovaná RNA vírusu hepatitídy C

V krvi sa RNA nachádza ako vzácny genotyp pre Rusko, ktorý nemožno pripísať prvému, druhému ani tretiemu typu. Je potrebný ďalší výskum.

Tento výsledok naznačuje, že pacient je zdravý, alebo že úroveň RNA patogénu je príliš malá.

Situácia je možná, keď je analýza PCR pre hepatitídu C negatívna a enzýmová imunoanalýza deteguje protilátky proti vírusu. To znamená, že pacient mal hepatitídu C v akútnej forme a uzdravil sa. Približne dvadsať prípadov infekcie vedie k spontánnemu vyliečeniu, ak pacientovo telo vykazuje dostatočnú odolnosť voči infekcii.

Napriek tomu, že PCR je vysoko presná analýza, jej výsledky môžu byť deformované v nasledujúcich situáciách:

• krv bola prepravovaná do laboratória za neprimeraných podmienok, teplotný režim bol porušený;
• vzorka biomateriálu bola kontaminovaná;
• v krvi boli zvyšné stopy heparínu a iných antikoagulancií;
• V skúmanej látke boli inhibítory - látky, ktoré spomaľujú alebo zastavujú polymerázovú reťazovú reakciu.

Výhody PCR v porovnaní s inými metódami

1. Diagnóza v počiatočných fázach. PCR deteguje genetický materiál pôvodcu ochorenia. Pomocou imunofluorescenčnej analýzy je možné určiť iba imunoglobulíny - látky, ktoré telo produkuje ako odpoveď na infekciu. V prípade infekcie spôsobenej hepatitídou C môže byť interval medzi infekciou a nástupom imunitnej odpovede niekoľko týždňov a mesiacov, kedy bude ELISA neúčinná. PCR poskytne odpoveď už v prvom týždni po infekcii.

Ako sa pripraviť na dodanie krvi na výskum PCR

Pri analýze PCR sa na hepatitídu C odoberá žilná ​​krv. Zvyčajne sa z pacientovej žily okamžite odoberú dve časti krvi: prvý sa odošle na PCR a druhý pre ELISA. To sa robí s cieľom presnejšie posúdiť, ako veľmi je pacient infikovaný vírusom a ako proti nemu bojuje imunita.

Zvyčajne sa od pacienta vyžadujú nasledujúce pravidlá:

• krvný test sa vyšetruje ráno;
• prestávka medzi posledným jedlom a dodaním krvi by mala byť 8 až 10 hodín;
• dva alebo tri dni pred analýzou sa musíte vzdať smažených a mastných jedál a alkoholu;
• dvadsaťštyri hodín pred analýzou by sa mal pacient vyhnúť fyzickej námahe: nenosia váhy, nechodia do telocvične ani do bazéna.