Zanechajte komentár 2,929

Na detekciu vírusovej hepatitídy v tele sa v medicíne široko používa metóda enzýmovej imunoanalýzy založená na detekcii koncentrácie a typu antigénov s protilátkami a enzýmami. Vykonáva sa postupne, laboratórnym výskumom s vysokou presnosťou indikácií. V závislosti od množstva a triedy protilátok sa farba a koncentrácia enzýmu, ktorý používa ELISA, mení a podľa toho lekár diagnostikuje túto chorobu.

Čo je EIA?

Prítomnosť vírusovej hepatitídy v tele pacienta sa určuje sérologickou metódou krvného testovania na prítomnosť vírusu HCV a markerov (telies a protilátok), ktoré na ne ukazujú. Imunoenzýmová analýza (ELISA) skúma rôzne vírusy, nízkomolekulárne zlúčeniny, makromolekuly, ich kvalitatívne a kvantitatívne indexy s použitím prejavov reakcie na ich antigény. Na tento účel sa enzým používa ako značka na registráciu signálu. V medicíne sa čoraz viac používa, pretože ELISA jednoznačne nachádza striktne definované antigény, nie je mätúce s inými, má vysokú citlivosť na prítomnosť invázie vírusovej hepatitídy.

Analýza sa má uvádzať na prázdny žalúdok.

Mínus takejto diagnózy je nemožnosť odhaliť príčinu ochorenia, pretože metóda poukazuje len na reakciu imunitného systému tela. Výsledky analýzy sú ovplyvnené očkovaním vykonaným skôr. 8 hodín pred analýzou sa odporúča zdržať sa konzumácie, nikotínu, alkoholu. Základom testu ELISA je enzýmová a imunitná odpoveď organizmu na vírus. Biologické molekuly sa viažu na bunku a jej prvky, mikroorganizmy, detegujú vírus, potom fungujú enzýmy, ktoré umožňujú vyjadriť imunitnú odpoveď vo viditeľnom a merateľnom parametri.

Indikácie pre analýzu

Vírusová hepatitída v tele môže spôsobiť rakovinu a cirhózu pečene. Význam včasnej diagnózy je nepopierateľný. Primárnou metódou diagnostiky je test ELISA, ktorý presne určuje prítomnosť vírusu HCV (IgM a IgG) a aktivitu jeho stopových prvkov. Bez zlyhania sa predložia testy na vírusovú hepatitídu:

1. Ľudia z rizikových skupín (drogovo závislých, pacientov s AIDS, lekárskych a personálnych orgánov).
2. Ľudia s akútnou alebo chronickou formou hepatitídy.
3. Tehotná a plánuje ženy na tehotenstve.

ELISA rozpoznáva ochorenie v ktoromkoľvek štádiu. Výsledky analýzy sú v priemere pripravené na 2 dni.

Kritériá, ktoré určujú dôležitosť analýzy

Test ELISA určuje prítomnosť protilátok triedy IgG, IgM, IgA. Pri diagnostike vírusovej hepatitídy lekár nevenuje pozornosť svojmu typu, pretože prítomnosť takejto manifestácie vírusu HCV už naznačuje akútny alebo chronický štádiu ochorenia. V počiatočných štádiách ochorenia sa hladina IgM zvyšuje (5 dní po infekcii); IgG protilátky sa objavujú 15-20 dní a môžu byť v ľudskej krvi dlhú dobu aj po vyliečení; IgA - objaví sa po 10-14 dňoch, po ošetrení klesá.

V prípade, že sa IgG a IgA detegujú po použití liekov a ich hladina zostáva v rovnakom indexe - nosič má chronickú formu hepatitídy. Dôležitým kritériom pre test bude jasná definícia triedy protilátok a ich počet. Na základe toho možno poznať nielen prítomnosť choroby, ale aj štádium jej vývoja. Detekcia takýchto prvkov v krvi pacienta umožňuje predpísať správnu a včasnú liečbu, aby sa zabránilo vážnejším následkom.

Ako sa vykonáva?

Izolujte priamy a nie priamy test ELISA. Etapy priameho:

1. Zhromažďovanie biologického materiálu a jeho umiestňovanie do špeciálnych vrtov.
2. Za 15-30 minút. antigény sa pripoja k povrchu jamiek.
3. Pridanie protilátok k jamkám k nájdenému antigénu. Nechajte všetko po dobu 1-5 hodín.
4. Odstránenie nezasadených antigénov (odlievanie obsahu jamiek).
5. Opláchnite studne špeciálnym roztokom.
6. Do jamiek sa pridá roztok enzýmu. Nechajte 30 minút až 1 hodinu.
7. Použite kolorimetriu (odhalí farbu a koncentráciu farby obsahu studne, porovnanie s indikátormi, ktoré sú priamo úmerné koncentrácii vírusu).

Použitie na diagnostiku nepriamej metódy ELISA poskytne presnejší výsledok.

Nepriama metóda ELISA sa uskutočňuje použitím neoznačených protilátok proti detegovaným antigénom a následným pridávaním značiek. Najprv sa odoberie krv od pacienta a prenesie sa do otvorov počas 15 až 30 minút. (protilátky sú fixované s jamkami). Potom sa v nich zavedú neoznačené protilátky po dobu 1 až 5 hodín (vytvorí sa spojenie protilátok s antigénmi - imunitný komplex). Ďalej sa z jamiek naliali žiadne stopové prvky a premyli sa špeciálnym roztokom. V ďalšom štádiu laboratórny asistent pridá do jamiek mikroživiny po dobu 15-30 minút. (v tomto prípade neoznačené označením za vzniku komplexu protilátka-protilátka-antigén). Odstránenie prebytočného (voľného) pri vypúšťaní a oplachovaní roztokom sa znova odstráni. Ďalej sa zavádza enzým, ktorý mení farbu o 5-30 minúty. zostať v dierach a farebné dáta sú kontrolované proti údajom tabuľkových indikátorov. Nepriama metóda EIA je presnejšia.

Čo ukazuje ELISA v analýze vírusovej hepatitídy?

Imunosorbent odhaľuje prítomnosť infekcie (vírusov hepatitídy všetkých typov, HIV, herpes, syfilis, cytomegalovírus, osýpok, rubeoly, vírus mumpsu, vírus Epstein-Barrovej), markeru autoimunitných porúch, rakovinové bunky. Označuje reprodukčné poškodenie systému (zmena úrovne testosterónu, prolaktínu, estradiol a progesterón), poruchu štítnej žľazy, invázia helmintov, chlamýdie. Účinná na detekciu ureaplazmózy, čierneho kašľa, vírusu Dange, vírusu západného Nílu, Borrelia. Zoznam definícií je vysoký, obsahuje mnoho titulov.

Potvrdenie výsledkov

Stanovenie HCV antigénu metódou ELISA poskytuje 98% presnosť. Používa sa tiež na opakované testovanie biologického materiálu s fuzzy predchádzajúcimi indexmi. Prítomnosť antigénov IgM nie je indikátorom akútnej hepatitídy a vyžaduje si ďalší výskum. Pri opakovanom vykonávaní IFA sa výsledky testov zhodujú na 90-100%. V prípade minimálneho rozdielu sa ako indikátor použije priemerná hodnota. Na dosiahnutie maximálnej presnosti indikátorov sa odporúča, aby lekári vykonali biochemický krvný test paralelne. Na kontrolu výsledkov po enzymatickom imunoanalýze sa môžu použiť iné diagnostické metódy.

Metóda ELISA na detekciu hepatitídy

Moderná medicína pozná veľa ochorení pečene. Medzi najbežnejšie a najnebezpečnejšie patrí HCV (vírusová hepatitída C), pretože táto infekcia sa často vyvíja asymptomaticky a vedie k kritickým komplikáciám až do smrteľného výsledku. Preto je mimoriadne dôležitá včasná diagnostika ochorenia, vykonávaná rôznymi metódami, vrátane enzýmovej imunoanalýzy (ELISA) na detekciu protilátok proti vírusu v krvi.

Infekcia HCV na diagnostikovanie hepatitídy

V laboratórnej diagnostike sa na detekciu hepatitídy C (HCV infekcia) používajú dva typy metód:

1. Sérologická, založená na detekcii protilátok proti vírusu hepatitídy C (anti-HCV), sa tiež nazýva ELISA (enzýmová imunoanalýza). Je zameraný na detekciu anti-HCV (IgM a IgG markery) sa používa na skríning a diagnostiku hepatitídy C. Oba týchto markerov môže byť detekovaný v krvi (plazma) v rôznych kombináciách, ktoré vyžaduje správne klinickej interpretácii. Na potvrdenie prítomnosti anti-HCV sa vykoná test RIBA (rekombinantný imunoblot).
2. Molekulárno-biologický, zameraný na detekciu RNA vírusu. Test HCV RNA je priradený nasledujúcim kategóriám pacientov:
   • s identifikovanou anti-HCV;
   • bez zistených anti-HCV, ale so zavedenými epidemiologickými a klinickými údajmi, ktoré vyžadujú elimináciu akútnych foriem HCV.

RNA vírusu sa môže detegovať v krvi 14 dní po infekcii, to znamená pred vznikom anti-HCV, ktoré sa vyskytujú počas prvých 2 až 3 mesiacov.

Na konečné potvrdenie diagnózy (najmä keď je zistený iba jeden z dvoch markerov infekcie HCV), experti odporúčajú, aby sa HCV anti-HCV a HCV RNA opakovali po určitej dobe.

Identifikácia hepatitídy pomocou ELISA

Pre včasnej diagnostiky vírusovej hepatitídy, najmä asymptomatické, anicteric formulárov sére detegovať prítomnosť vírusových proteínov (antigény) alebo protilátok proti nemu (produkované imunitným systémom v priebehu prenikania do tela vírusy) pomocou enzýmového imunoanalýza (EIA). Ide o univerzálnu metódu imunologickej diagnostiky, jej podstatou je študovať interakciu "antigén-protilátka". Používa sa v mnohých krajinách sveta.

Stanovenie HCV metódou ELISA umožňuje nielen presnú diagnózu, ale tiež vyhodnotiť charakter choroby, rovnako ako vyberte príslušný a účinnú liečbu konvenčnými liečivami (interferón, ribavirín), drogovej priame akcie (sofosbuvir, Daklatasvir) a ich druhové Indii a Číne.

Ak je to možné, diagnóza vírusovej hepatitídy pomocou ELISA je doplnená o PCR (polymerázovú reťazovú reakciu), ktorá umožňuje určiť prítomnosť vírusov hepatitídy v krvi RNA.

Ako presná je metóda enzýmovej imunoanalýzy

Podľa odborníkov je presnosť metódy ELISA 95%, to znamená u 95 zo 100 pacientov pomocou enzýmovej imunoanalýzy je možné zistiť prítomnosť a množstvo HCV protilátok - IgM a IgG v krvi. Ak je výsledok pozitívny, môže sa diagnostikovať HCV kontakt s telom (nie samotný vírus, ale prítomnosť protilátok proti nemu v krvi, ktoré môžu byť výsledkom už prenesenej choroby).

Napriek vysokej citlivosti enzýmového imunosorbentu (ELISA) však 40% pacientov s pozitívnym výsledkom nemožno zistiť, čo naznačuje pochybný alebo falošne pozitívny výsledok.

Na potvrdenie správnosti výsledkov ELISA sa na presnejšiu detekciu protilátok proti HCV použije RIBA (rekombinantná imunoblotácia).

Test na jadro proti HCV

Účinné štúdie na určenie prítomnosti protilátok proti vírusom hepatitídy zahŕňajú anti-HCV jadro, ktoré sa používajú ako potvrdzujúci test na získanie "neistých" výsledkov.

Ak sa jadro anti-HCV deteguje v krvnom sére s riedením 1: 1000, je veľmi pravdepodobné, že sa dá diagnostikovať pozitívny výsledok, čiže choroba je prítomná.

Ak sú vzorky s riedením 1: 1000 negatívne, v riedení 1: 200 sú pozitívne, je potrebná štúdia na prítomnosť vírusovej RNA. V tomto prípade je s najväčšou pravdepodobnosťou žiadna HCV infekcia.

Je dôležité si uvedomiť, že u chronických foriem HCV protilátky sú detekované nepretržite, a pri eliminácii (vylučovaní z buniek) vírusu pretrvávať 4-8 rokov a viac. Vzhľadom k tomu, že prítomnosť anti-HCV, nie je vždy svedčiace o infekciu organizmu a neumožňuje objektívne závery o činnosti protsessa.Dlya získať presné údaje o vírusovej záťaže, stupeň poškodenia pečene, trvanie infekcie, a rozdiely akútnych a chronických foriem ochorení sa odporúča používať definíciu spektra protilátok na rôzne HCV peptidy. Je tiež dôležité sledovať ich kvantitatívnu a kvalitatívnu dynamiku.

Štúdie na vírus hepatitídy B (ELISA a PCR)

Antigén "s" vírusu hepatitídy B (HBsAg)

Povrchový antigén hepatitídy B v sére normálne chýba.
Detekcia povrchového antigénu (HBsAg) hepatitídy B v sére potvrdzuje akútnu alebo chronickú infekciu vírusom hepatitídy B.

V prípade akútneho ochorenia detekované HBsAg v sére v poslednom 1-2 týždňov inkubačnej dobe, a prvých 2-3 týždňov klinickej obdobie. Obeh krvi HBsAg môže byť obmedzená na niekoľko dní, takže by ste sa mali snažiť, aby začiatkom primárnym vyšetrenia pacientov. Metóda ELISA umožňuje detegovať HBsAg u viac ako 90% pacientov. Takmer 5% pacientov s najcitlivejších metód výskumu nezistí HBsAg, v takýchto prípadoch, etiológie vírusovej hepatitídy B potvrdená prítomnosťou anti-HBsAg JGM alebo PCR.

Sérová koncentrácia HBsAg vo všetkých formách hepatitídy B výška ťažiska ochorenie má značný rozsah variácií, má však určité pravidelnosti v akútnej fáze existuje inverzný vzťah medzi koncentráciou HBsAg v sére a na závažnosti ochorenia.

Vysoká koncentrácia HBsAg je bežnejšia v ľahkých a stredných formách ochorenia. V závažných a malígnych formách je koncentrácia HBsAg v krvi často nízka a u 20% pacientov s ťažkou formou av 30% malígneho antigénu v krvi sa nedá vôbec zistiť. Vzhľad na tomto pozadí u pacientov s protilátkami proti HBsAg sa považuje za nepriaznivý diagnostický znak; určuje sa v malígnych formách hepatitídy B.

Pri akútnej hepatitíde B sa koncentrácia HBsAg v krvi postupne znižuje, kým antigén úplne nezmizne. HBsAg zmizne u väčšiny pacientov v priebehu 3 mesiacov od nástupu akútnej infekcie.

Zníženie koncentrácie HBsAg o viac ako 50% do konca tretieho týždňa akútneho obdobia spravidla naznačuje blízky koniec infekčného procesu. Zvyčajne sa u pacientov s vysokou koncentráciou HBsAg v čase výskytu tejto choroby nachádza v krvi niekoľko mesiacov.
U pacientov s nízkou koncentráciou HBsAg zmizne oveľa skôr (niekedy niekoľko dní po nástupe choroby). Vo všeobecnosti sa detekcia HBsAg pohybuje v rozmedzí niekoľkých dní až 4 až 5 mesiacov. Maximálna doba detekcie HBsAg v hladkom priebehu akútnej hepatitídy B nepresiahne 6 mesiacov od nástupu ochorenia.

HBsAg môže byť detekovaná u zdanlivo zdravých ľudí, väčšinou v priebehu cvičenia alebo náhodných vyšetrovania. V takých prípadoch, skúmať ďalšie markery vírusu hepatitídy B - proti HBsAg JGM, anti-HBsAg JGG, proti HBeAg a študovať funkciu pečene.

Ak sú výsledky negatívne, sú potrebné opakované štúdie na HBsAg.
Ak opakované krvné testy dlhšie ako 3 mesiace odhalili HBsAg, tento pacient sa označuje ako chronický pacient s vírusovou hepatitídou B.
Prítomnosť HBsAg je celkom bežná. Vo svete je viac ako 300 miliónov dopravcov, a v našej krajine - asi 10 miliónov dopravcov.
Ukončenie cirkulácie HBsAg, po ktorom nasleduje sérokonverzia (tvorba anti-HBs), vždy indikuje regeneráciu - sanáciu tela.

Krvný test na prítomnosť HBsAg sa používa na nasledujúce účely:

na diagnostiku akútnej hepatitídy B:

• inkubačná doba;
• akútne obdobie ochorenia;
• počiatočná fáza rekonvalescencie;
  

na diagnostikovanie chronickej vírusovej hepatitídy B;

s chorobami:

• pretrvávajúca chronická hepatitída;
• cirhóza pečene;

na skríning a identifikáciu rizikových pacientov:

pacienti s častými krvnými transfúziami;

pacienti s chronickou renálnou insuficienciou;

pacienti s viacnásobnou hemodialýzou;

pacientov s stavmi imunodeficiencie, vrátane AIDS.

Hodnotenie výsledkov výskumu

Výsledky výskumu sú vyjadrené kvalitatívne - pozitívne alebo negatívne. Negatívny výsledok štúdie naznačuje nedostatok HBsAg v sére. Pozitívny výsledok - detekcia HBsAg naznačuje inkubáciu alebo akútne obdobie akútnej vírusovej hepatitídy B, ako aj chronickej vírusovej hepatitídy B.

Protilátky proti jadrovému antigénu vírusu hepatitídy B JgG (anti-HBcAg JgG)

V norme anti-HBcAg JgG chýba v sére.
U pacientov s anti-HBcAg sa JgG vyskytuje v akútnom období vírusovej hepatitídy B a pretrváva počas celého života. Anti-HBcAg JgG je vedúcim markerom preneseného HBV.

Na diagnostiku sa používa krvný test na prítomnosť anti-HBcAg JgG:

chronická vírusová hepatitída B v prítomnosti antigénu HBs v krvnom sére;

prenesený vírus hepatitídy B.

Hodnotenie výsledkov výskumu

Výsledok výskumu je vyjadrený kvalitatívne - pozitívny alebo negatívny. Negatívny výsledok štúdie naznačuje neprítomnosť anti-HBcAg JgG v sére. Pozitívny výsledok - detekcia anti-HBcAg JgG naznačuje akútnu infekciu, rekonvalescenciu alebo predtým prenesenú vírusovú hepatitídu B.

Antigén "e" vírusu hepatitídy B (HBeAg)

Norma HBeAg v sére chýba.
HBeAg môže byť detegovaný v sére väčšiny pacientov s akútnou vírusovou hepatitídou B. Zvyčajne zmizne v krvi pred HBs-antigénom. Vysoká hladina HBeAg v prvých týždňoch ochorenia alebo jeho zistenie po dobu dlhšiu ako 8 týždňov vedie k podozreniu na chronickú infekciu.

Tento antigén sa často vyskytuje v chronickej aktívnej hepatitíde vírusovej etiológie. Zvláštny záujem o definíciu HBeAg je spôsobený tým, že jeho detekcia charakterizuje aktívnu replikačnú fázu infekčného procesu. Zistilo sa, že vysoké koncentrácie HBeAg zodpovedajú vysokej aktivite DNA polymerázy a charakterizujú aktívnu replikáciu vírusu.

Prítomnosť HBeAg v krvi dokazuje vysokú infekčnosť, t.j. prítomnosť testovanej aktívnej infekcie hepatitídy B v tele a je detekovaná iba v prítomnosti antigénu HBs v krvi. U pacientov s chronickou aktívnou hepatitídou sa antivírusové lieky používajú len vtedy, keď je HBeAg detegovaný v krvi. HBeAg - antigén je markerom akútnej fázy a replikácie vírusu hepatitídy B.

Krvný test na prítomnosť antigénu HBe sa používa na diagnostiku:

inkubačná doba vírusovej hepatitídy B;

prodromálne obdobie vírusovej hepatitídy B;

akútne obdobie vírusovej hepatitídy B;

chronická perzistentná vírusová hepatitída B.

Hodnotenie výsledkov výskumu

Výsledok výskumu je vyjadrený kvalitatívne - pozitívny alebo negatívny. Negatívny výsledok štúdie naznačuje nedostatok HBeAg v sére. Pozitívny výsledok - detekcia HBeAg indikuje inkubáciu alebo akútne obdobie akútnej vírusovej hepatitídy B alebo pokračujúcu replikáciu vírusu a infekčnosť pacienta.

Protilátky proti antigénu "e" vírusu hepatitídy B (anti-HBeAg)

Anti-HBeAg v sére normálne chýba. Vzhľad anti-HBeAg protilátok zvyčajne indikuje intenzívne vylučovanie vírusu hepatitídy B z tela a menšiu infekciu pacienta.

Tieto protilátky sa objavujú v akútnom období a pretrvávajú až do 5 rokov po infekcii. Pri chronickej pretrvávajúcej hepatitídy, anti-NVeAg v krvi pacienta s HBsAg. Sérokonverzia, t.j. Prechod na anti-HBeAg NVeAg, chronickej aktívnej hepatitídy, viac prognosticky priaznivé, ale rovnaký sérokonverzia vážne cirhózou transformáciu pečene nie je zlepšiť prognózu.

Štúdium krvi na prítomnosť anti-HBeAg sa používa v nasledujúcich prípadoch pri diagnostike vírusovej hepatitídy B:

zriadenie počiatočného štádia choroby;

akútne obdobie infekcie;

počiatočná fáza rekonvalescencie;

rekonvalescencia;

neskorá fáza rekonvalescencie.

diagnostika nedávno prenášaného vírusu hepatitídy B;

diagnostikovanie chronickej pretrvávajúcej vírusovej hepatitídy B.

Hodnotenie výsledkov výskumu

Výsledok výskumu je vyjadrený kvalitatívne - pozitívny alebo negatívny. Negatívny výsledok štúdie naznačuje neprítomnosť protilátok proti HBeAg v sére. Pozitívne výsledky - detekcia protilátok proti HBeAg, čo môže znamenať, skorú fázu akútnej vírusovej hepatitídy B, akútna infekcia obdobie počiatočných fázach obnovy, využitia, v poslednej dobe prenesené vírusovej hepatitídy B alebo pretrvávajúce vírusovej hepatitídy B.

Kritériá pre prítomnosť chronickej hepatitídy B sú:

detekciu alebo pravidelnú detekciu HBV DNA v krvi;

konštantné alebo pravidelné zvýšenie aktivity ALT / AST v krvi;

morfologické známky chronickej hepatitídy v histologickej štúdii biopsie pečene.

Detekcia vírusu hepatitídy B pomocou PCR (kvalitatívne)

Vírus hepatitídy B v krvi obyčajne chýba.
Kvalitatívna definícia vírusu hepatitídy B pomocou PCR v krvi umožňuje potvrdiť prítomnosť vírusu v tele pacienta a tým stanoviť etiológiu ochorenia.

Táto štúdia poskytuje užitočné informácie pre diagnostiku akútnej vírusovej hepatitídy B pri inkubácii a včasnom vývoji ochorenia, keď môžu chýbať hlavné sérologické markery v krvi pacienta. Vírusová DNA v sére je detekovaná u 50% pacientov v neprítomnosti HBeAg. Analytická senzitivita metódy PCR nie je menšia ako 80 vírusových častíc v 5 μl, v ktorej bola detegovaná vzorka DNA, špecificita bola 98%.

Táto metóda je dôležitá pre diagnostiku a monitorovanie chronického HBV. Približne 5 až 10% cirhóza pečene a ďalších ochorení chronickej pečeňovej kvôli chronickej prepravu vírusom hepatitídy B markery aktivity takých ochorení, je prítomnosť HBeAg a HBV DNA v krvi.

Metóda PCR umožňuje určiť DNA vírusu hepatitídy B v krvi kvalitatívne a kvantitatívne. Zistiteľný fragment v obidvoch prípadoch je jedinečná DNA sekvencia génu štrukturálneho proteínu vírusu hepatitídy B.

Detekcia DNA vírusu hepatitídy B v biomateriáli pomocou PCR je potrebná pre:

riešenie sporných výsledkov sérologických štúdií;

detekcia akútneho štádia ochorenia v porovnaní s prenosnou infekciou alebo kontaktom;

monitorovanie účinnosti antivírusovej liečby.

Zmiznutie DNA vírusu hepatitídy B z krvi - znamenie účinnosti liečby

Detekcia vírusu hepatitídy B pomocou PCR (kvantitatívne)

Táto metóda poskytuje dôležité informácie o intenzite ochorenia, účinnosti liečby a vývoji rezistencie na liečivá.
Pre diagnostiku vírusových hepatitíd pomocou PCR v sére použitého testovacieho systému, citlivosť, ktorá je 50-100 kópií na vzorke, čo umožňuje detekciu vírusu v koncentrácii 5 x 10 ^ 3 ^ 4 -10 kópií / ml. PCR s vírusovou hepatitídou B, je absolútne nevyhnutné pre úsudku vírusovej replikácie.

Vírusová DNA v sére je detekovaná u 50% pacientov v neprítomnosti HBeAg. Materiál na detekciu DNA vírusu hepatitídy B môže byť sérum, lymfocyty, hepatobiob.

• Vyhodnotenie úrovne virémie sa uskutočňuje nasledovne:
• menej ako 2,10-5 kópií / ml (menej ako 2,10-5 IU / ml) - nízka virémia;
• z 2,10 - 5 kópií / ml (2,10 - 5 IU / ml) na 2,10 - 6 kópií / ml (8,10-5 IU / ml) - priemernej virémie;
• viac ako 2,10 ^ 6 kópií / ml - vysoká viremia.

Existuje vzťah medzi výsledkom akútnej vírusovej hepatitídy B a koncentráciou HBV DNA v krvi pacienta. Pri nízkych úrovniach virémie procesu chronickej infekcie sa blíži nule, s priemerom - chronization proces je pozorovaná u 25-30% pacientov, ale s vysokou úrovňou virémie v akútnej vírusovej hepatitídy často stáva chronickou.

Indikácie na liečbu chronickej HBV s interferónom alfa považovaná za prítomnosť aktívnych vírusových markerov replikácie (detekcia HBsAg, HBeAg a DNA v sére HBV v predchádzajúcich 6 mesiacov.).

Výsledky merania slúži vymiznutia HBeAg a HBV DNA v krvi, ktorá je zvyčajne sprevádzaná normalizácii hladiny transamináz a dlhodobé remisii ochorenia, HBV DNA miznú z krvi do 5. mesiaca liečby u 60%, do 9. mesiaca - 80% pacientov. Znižovanie hladiny virémie o 85% alebo viac tretím dňom od začiatku liečby v porovnaní s východiskovým stavom, je rýchly a presný dosť kritériom pre predikciu účinnosti liečby.

EIA pre hepatitídu C

IFA hepatitída C účinne určuje, to je jedna z metód diagnostiky ochorenia založená na interakcii antigénov a protilátok. Imunochemická reakcia testom ELISA (enzýmová imunoanalýza) umožňuje detekciu protilátok proti HCV v tele. Metóda umožňuje diagnostikovať ľudskú hepatitídu C diferencovaným spôsobom, určiť stupeň vývoja ochorenia, predvídať jeho priebeh. Detekcia špecifických sérologických markerov tiež umožňuje výber účinnej antivírusovej liečby patológie.

Vlastnosti metódy

Analýza na detekciu protilátok proti vírusu hepatitídy typu C v ľudskej krvi sa uskutočňuje pripojením cudzieho mikroorganizmu (antigénu) k molekule imunoglobulínu. Priložený enzymatický enzým hrá úlohu rozlišovacej značky. Umožňuje sledovať imunochemickú reakciu, ako aj jednu z jej zložiek.

Ako zložky enzýmovej imunoanalýzy môžu pôsobiť:

• protilátky;
• protilátky označené špeciálnym enzýmom;
• antigény;
• substráty enzýmov;
• indikátorové farbivá.

Keď cudzie škodlivé mikroorganizmy vstupujú do ľudského tela, ochranné sily začínajú produkovať imunoglobulíny (protilátky). Následne pôsobia na antigény a neutralizujú ich. Takáto interakcia vedie k tvorbe protilátok-antigénu, ktorý má svoje ukazovatele množstva a kvality. Označujú prítomnosť alebo neprítomnosť infekcie HCV v tele. Ak je výsledok imunologického testu enzýmu pozitívny, objaví sa vírus hepatitídy typu C.

Moderné technológie v medicíne môžu značne skrátiť časový rámec na detekciu vírusu hepatitídy, ktorý sa vyskytuje v akútnej forme. Vďaka diagnostickým systémom tretej generácie sa tiež zdá byť možné zvýšiť špecifickosť a senzitivitu imunochemickej reakcie.

Hlavným študijným materiálom pre IFA je venózna krv (vrátane darcovskej krvi). Podľa indikácií môže dôjsť k stiahnutiu cerebrospinálnej tekutiny alebo plodovej vody.

Pozitívny výsledok metódy ELISA pre hepatitídu typu C neznamená vždy prítomnosť vírusovej infekcie v tele. Vo viac ako 35% prípadov sa v krvi nevyskytujú žiadne vírusové antigény, čo vedie k falošne pozitívnemu výsledku.

Metóda umožňuje sledovať kvantitatívne a kvalitatívne zmeny, rozlišujúce akútne a chronické formy hepatitídy C. Avšak na určenie aktivity patologického procesu je to neúčinné. Ak chcete presnejšie potvrdiť prítomnosť HCV infekcie, mali by sa použiť aj iné metódy diagnostiky patológie.

Indikácie pre EIA

Spôsob detekcie druhov a kvantitatívnej koncentrácie cudzích mikroorganizmov (antigénov) pomocou imunoglobulínov a enzýmov sa uskutočňuje v niekoľkých štádiách. Na základe zmeny farby a kvantitatívneho indexu enzýmu môže lekár diagnostikovať osobu s hepatitídou typu C.

Nasledujúce kategórie ľudí pravdepodobne ochorejú:

1. Pacienti, ktorí podstúpili operáciu, ako aj ochorenia vnútorných orgánov a systémov.
2. Infikovaných HIV (infikovaných vírusom ľudskej imunodeficiencie). Veľké percento ľudí v tejto skupine sú drogovo závislí.
3. Zdravotnícki pracovníci.
4. Úradníci na presadzovanie práva.
5. Tehotné ženy.

Hepatitída vírusového pôvodu často vedie k vzniku rakoviny (napríklad rakoviny pečene). Preto sa krvné testy na enzýmové imunosorbentné testy majú vykonať predovšetkým pre ľudí, ktorí sú v hlavnej rizikovej skupine, ako aj pre pacientov s akútnou alebo chronickou formou hepatitídy.

Podľa svedectva lekára môže predpísať spôsob vykonania EIA u pacientov, ktorí sú diagnostikované:

• PSI (infekcie prenášané pohlavnou cestou);
• choroby vírusového pôvodu (papilomavírus, herpetická infekcia, hepatitída atď.);
• alergická povaha patológie;
• stav imunitnej nedostatočnosti;
• onkológie.

Výhody a nevýhody

IFA hepatitída C môže byť detegovaná v počiatočnom štádiu, ako aj v asymptomatických a žltačkových formách. Tak ako každá diagnostická metóda, má niekoľko výhod a nevýhod.

Medzi pozitívne znaky testu ELISA experti identifikujú:

1. Presnosť kvalitatívnych a kvantitatívnych ukazovateľov. Citlivosť metódy presahuje ďalšie štúdie na detekciu hepatitídy desaťkrát.
2. Významné zníženie načasovania detekcie vírusovej infekcie prostredníctvom moderných diagnostických systémov.
3. Nízka cena v porovnaní s inými štúdiami o detekcii hepatitídy u ľudí.
4. Možnosť diagnostiky ochorenia pečene v počiatočnom štádiu bez závažných príznakov.
5. Podrobný výskum pomocou automatizovaných procesov.

Napriek vysokej presnosti testu ELISA sa nezistilo viac ako 35% prípadov s pozitívnym výsledkom vírusu hepatitídy u pacienta. Často test nepotvrdzuje patológiu, čo poukazuje na pochybný alebo negatívny výsledok.

Spoľahlivosť štúdie ovplyvňuje do určitej miery:

1. Prijímanie liekov.
2. Poruchy metabolických procesov v tele.
3. Prítomnosť niektorých chorôb chronickej povahy, ktoré podporujú aktívnu produkciu imunoglobulínov.

Vzhľadom na nedostatky výsledkov in vitro skúseností s metódou ELISA sa pacientovi podávajú dodatočné štúdie. Na spoľahlivú detekciu protilátok proti vírusu hepatitídy C sa používa metóda PCR (polymerázová reťazová reakcia) alebo metóda RIBA (rekombinantná imunoblotácia).

Čo identifikuje a ako sa uskutočňuje štúdia

Analýza ELISA môže odhaliť širokú škálu ochorení u ľudí.

Okrem detekcie protilátok hepatitídy všetkých druhov môže pozitívny výsledok testu indikovať prítomnosť nasledujúcich patológií v tele:

• vírus ľudskej imunitnej nedostatočnosti;
• herpetická infekcia;
• syfilis;
• STI (ureaplasmosis, chlamýdie, atď.);
• HPV;
• cytomegalovírus.

Štúdia je takisto druhom značky na detekciu malígnych novotvarov, genetických patológií, hormonálnych porúch a funkčných porúch vo fungovaní endokrinného systému.

Príprava na dodávku biologického materiálu na detekciu vírusu hepatitídy C znamená odmietnutie užívania potravy a liekov 12 hodín pred štúdiom. Predpokladom je aj abstinencia od pitia alkoholu, mastných, vyprážaných a slaných jedál.

Priama metóda ELISA

Hlavné kroky pri vykonávaní priameho testu sú nasledovné:

1. Spočiatku laboratórny pracovník extrahuje krv z žily (alebo iného biologického materiálu) a potom ho umiestni do špeciálnych nádob.
2. Cudzie mikroorganizmy (antigény) sa k nim začnú pripájať do 20 minút.
3. Špecialista pridá imunoglobulíny (protilátky) k nájdeným antigénom, aby vytvorili imunitnú odpoveď. V tomto prípade sú komponenty ponechané niekoľko hodín.
4. Nepripojené antigény sa odstránia nalievaním obsahu z kontajnerov.
5. Materiál Roztok sa prepláchne a potom sa spracuje s enzýmami a ponechaný po dobu jednej hodiny.
6. Farba a koncentrácia obsahu sa analyzuje pomocou kolorimetrie.

Ak kvantitatívny index obsahu presahuje prípustné normy, znamená to prítomnosť vírusu hepatitídy C v ľudskom tele.

Nepriama metóda ELISA

Zahŕňa interakciu neznačených imunoglobulínov s antigénmi, ku ktorým sú pripojené následne označené protilátky.

Na začiatku pacient odoberie krv z žily. Potom sa biologický materiál umiestni do špeciálnych nádob asi pol hodiny. V tomto neznačených protilátkach sú pripojené na steny nádrží. Potom sa k nim pridajú označené protilátky. Výsledkom ich interakcie je vytvorenie imunitného komplexu "protilátka-antigén".

Po 4 hodinách sa obsah kontajnerov vylije a nezasadené mikroelementy sa odstránia. Laboratórny asistent pripojí označené protilátky k už vytvorenému komplexu s imunitnou reakciou "protilátka-protilátka-antigén".

Po opakovanom odstránení voľných mikroživín sa do nádoby pridá špeciálny enzým, ktorý mení farbu a kvantitatívne indexy obsahu. Na základe získaného výsledku odborník skontroluje údaje a urobí záver.

Vysvetlenie výsledkov

Pri vykonávaní testu ELISA sa pozornosť venuje prítomnosti alebo neprítomnosti protilátok triedy IgA, IgG a IgM. Kvantitatívne indexy týchto protilátok sa porovnávajú s údajmi v osobitnej tabuľke.

Podľa nej je interpretácia výsledkov nasledovná:

1. Ak nie sú stanovené všetky tri typy indikátorov, osoba sa úplne obnoví.
2. So súčasným pozitívnym výsledkom pre všetky tri ukazovatele je pozorovaná akútna forma vírusovej infekcie.
3. Ak sa stanovia protilátky triedy IgG, pričom zvyšné triedy nie sú detegované, potom osoba vyvinula postinfekčnú imunitu.
4. Chronický charakter ochorenia je indikovaný pozitívnymi indexmi protilátok tried IgG a IgA. Zostávajú však aj po liečbe liekom nezmenené.
5. Pri pozitívnej detekcii všetkých troch typov protilátok môže dôjsť k relapsu chronickej povahy hepatitídy.

Podľa štatistických údajov začína hladina IgM stúpať po niekoľkých dňoch po vniknutí infekcie do tela, čo naznačuje skoré štádium patológie. IgG protilátky sa zvyčajne objavujú 2 týždne po nástupe ochorenia a sú dlhodobo v krvi (aj po zotavení). IgA protilátky sa detegujú po 2 týždňoch, zatiaľ čo po liečení sa ich koncentrácia v tele znižuje.

Pamätajte, že pozitívny test ELISA proti hepatitíde C neznamená vždy infekciu. Často sa test považuje za falošne pozitívny, čo si vyžaduje opätovné darovanie krvi. V niektorých prípadoch je pacientovi pridelené ďalšie štúdie na presnejšie stanovenie krvného obrazu.

Hlavným kritériom pre test je presná identifikácia kvantitatívnych a typických ukazovateľov. Umožňujú určiť nielen prítomnosť vírusu, ale aj formu ochorenia. Diagnóza hepatitídy C pomocou moderných metód umožní začať včasnú lekársku terapiu a minimalizovať negatívne dôsledky.

Diagnóza hepatitídy ifa

Diagnóza začína vyšetrením pacienta. Na správnu a včasnú diagnostiku "vírusovej hepatitídy" lekári najskôr vyšetria pacienta, pošlú ho na krvné testy a močové testy.

Po prvé, sa dávať pozor na také vlastnosti počiatočného obdobia príznakov ochorenia, ako je napríklad letargia, všeobecného svalová slabosť, strata chuti do jedla, nevoľnosť, bolesti brucha, tmavý moč, zvýšené pečeňové a tesnením, zvýšená citlivosť bolesť vo svojom spodnom okraji. Vo všeobecnej analýze krvi lekári venujú pozornosť obsahu leukocytov, lymfocytov a ESR.

Uchádzať do biochemických krvných a močových testov s cieľom posúdiť stupeň poškodenia pečene a potvrdiť, či je žltačka spojená s zápalom pečene. Najinentatívnejšia je hladina žlčového pigmentu - bilirubínu, ktorý sa tvorí v pečeni v dôsledku rozpadu červených krviniek.

Bežne sa bilirubín viaže s krvnými proteínmi a nemá toxický účinok na telesné tkanivá. Pri hepatitíde sa koncentrácia voľného a viazaného bilirubínu v krvi prudko zvyšuje. Keď prekročí 200-400 mg / l, žltačka sa stane viditeľným očkom.

Hovorí sa o poškodení hepatocytov, že zvyšujúca sa hladina transaminázovej aktivity - AlAT a AsAT, ktoré vstupujú do krvi z pečeňových buniek cez poškodené membrány. Existujú aj špeciálne testy stavu koagulačného systému, v ktorom sa zúčastňujú proteíny syntetizované v pečeni. Diagnostická hodnota má pozitívnu reakciu na urobilín v moči.

Dôkaz o porušení pečene je indikátorom - vzorka timol. Zmena protrombínového indexu charakterizuje závažnosť priebehu vírusovej hepatitídy a zvýšenie aktivity alkalickej fosfatázy, celkový bilirubín, naznačuje porušenie sekrečnej funkcie pečene. Reakcia moču na žlčové pigmenty na začiatku ochorenia je pozitívna oveľa menej často.

V diagnostike sa dôležitá úloha akútnych aj chronických foriem vírusovej hepatitídy podáva ultrazvukovému vyšetreniu orgánov brušnej dutiny. Pomocou tejto metódy môžu lekári identifikovať tieto zmeny sú na vonkajšej vyšetrenie nie je detekovaná: zväčšenie pečene, kontrakcie pečeňových žíl, tesniaci a zhrubnutie stien, známky zápalu žlčníka a pankreasu, expanzia portálu a sleziny žily, splenomegália, lymfadenopatia, Najdôležitejším spôsobom diagnostiky, najmä chronickej hepatitídy, je biopsia pečene.

Metódy na detekciu protilátok a antigénov v krvi a iných telesných tekutinách zahŕňajú sérologickú diagnózu. Pre včasnej diagnostiky vírusovej hepatitídy, vrátane anicteric asymptomatické formy sérový detekovať prítomnosť vírusových proteínov (antigény, známej tiež ako markery vírusovej hepatitídy), alebo protilátky k nej cez immupofermentnogo testu (ELISA). Okrem toho, IFA prípadne doplnené pomocou PCR (PCR), ktorý umožňuje určiť prítomnosť séra vírusovej nukleovej kyseliny - DNA vírusu hepatitídy B, hepatitídy iné RNA vírusy, čo je dôležité najmä pre skoré zahájenie liečby.

Imunoenzýmová analýza (ELISA) je univerzálna metóda imunologickej diagnostiky, ktorá sa v praxi široko používa. Je určený na detekciu vírusových proteínov (antigénov) alebo protilátok, ktoré sú produkované imunitným systémom v reakcii na penetráciu vírusov do ľudského tela. Tieto proteíny sú druhom značiek alebo znakov, ktorých prítomnosť umožňuje presne stanoviť diagnózu, posúdiť povahu ochorenia, pomôcť ošetrujúcemu lekárovi vybrať správnu liečbu. Táto metóda je založená na známej interakcii "antigén-protilátka".

Na stanovenie antigénov uvoľňujú rôzne komerčné firmy testovacie systémy, ktoré sú 96-jamkové polystyrénové platne. Na dno jamiek pre-Sorb ( "šité") protilátky na určitý antigén patogénu, ako je napríklad povrchový antigén vírusu hepatitídy B - HBs antigénu.

V prvej fáze sa do každej jamky pridá vzorka, napríklad sérum krvi pacienta v rôznych riedeniach, ktoré obsahujú ešte neurčený vírusový proteín (antigén). Ak sa tento proteín (antigén) "naučil" svoju protilátku, potom dochádza k jej väzbe. To znamená, že sérum pacienta obsahuje antigén, ktorého protilátky sú sorbované na dne platne.

Aby sme videli výsledky tejto reakcie, je ďalší krok, v ktorom sa do komplexu "antigén-protilátka" pridá zlúčenina, ktorá sa viaže na protilátku. Táto zlúčenina obsahuje enzým, napríklad chrenovú peroxidázu. Po pridaní substrátu sa tento rozdelí a následne žltohnedý roztok.

V ďalšom kroku sa každá jamka dôkladne umyje z nezreagovaných zložiek. V tých jamkách, kde sa antigén, ako v našom prípade, úplne viaže na protilátku, už nemôže reagovať so zlúčeninou, ktorá sa pridáva.

Preto sa počas prania odstráni zo studne. Keď sa sérum zriedi, obsah protilátky v ňom klesá a už nie sú schopní úplne viazať antigén. V týchto jamkách sa zlúčenina obsahujúca enzým viaže k antigénu a zostáva v studni po premytí. V ďalšom kroku sa pridá substrát a pozorujú sa výsledky reakcie, ktoré sa hodnotia vizuálne alebo spektrofotometrom.

Zistili sme, že v sére vzorky od pacienta obsahuje HBs-antigén. Môžete tiež zistiť množstvo alebo titer určujúci posledné zriedenie séra, kde sa objavila žltá farba. Čím je stupeň zriedenia vyšší, tým vírus je obsiahnutý v krvi pacienta.

Podobne môže byť stanovená prítomnosť protilátok proti jednému alebo inému pôvodcovi vírusovej hepatitídy. Iba v týchto prípadoch sa diagnostické testovacie systémy používajú s "šitím" na dno jamiek nie s protilátkami, ale so známymi antigénmi. Výhodou tejto metódy je vysoká senzitivita a špecifickosť, jednoduchosť formulácie reakcie, možnosť súčasného vyšetrenia veľkého počtu pacientov. Medzi nedostatky tejto metódy možno poukázať na potrebu špeciálneho drahého vybavenia a primeraných zručností personálu.

Metóda polymerázovej reťazovej reakcie

V modernej laboratórnej diagnostike má PCR zvláštne miesto. Metóda PCR zvýšila klinickú laboratórnu diagnostiku v zásadne odlišnej výške - úroveň stanovenia nukleovej kyseliny (DNA a RNA), ktorá umožňuje priamu detekciu infekčného agens alebo genetickú mutáciu v akomkoľvek biologickom prostredí.

Týmto spôsobom môže byť jedna kandidátna molekula nukleovej kyseliny teoreticky nájdená medzi miliónmi ďalších. Z hľadiska klinickej medicíny je stanovenie nukleovej kyseliny ekvivalentné detekcii patogénu v predmete štúdie.

Z biológie je známe, že nukleové kyseliny (DNA alebo RNA) majú vlastnosť samoreprodukcie (reprodukcie). Tento princíp je základom metódy PCR, keď sa tento proces uskutočňuje umelo v laboratóriu. K tomu je najskôr izolovaná nukleová kyselina od chorého tkaniva (napríklad v prípade podozrenia na vírusovú hepatitídu).

Vykonáva úlohu určitého druhu "matice", na ktorom sa uskutočňuje syntéza. Nukleová kyselina má svoj vlastný "imprint" - jedinečnú sekvenciu nukleotidov, z ktorej sa skladá. Pre každý patogén bola takáto sekvencia študovaná, bola zostavená pôvodná "mapa".

Najdôležitejší prvok v PCR Je primer (krátke rezy DNA, komplementárne k (zodpovedajúcim) oblastiam nukleovej kyseliny izolovanej zo vzorky). Priméry poskytujú spustenie a špecificitu reakcie.

Testovací systém PCR teda pozostáva zo zmesi nukleových kyselín testovanej vzorky, priméru a špeciálnych enzýmov (polymeráz)), ktorými je táto reakcia nemožná. Analýza PCR zahŕňa niekoľko cyklov (krokov), ktoré vedú k replikám rozoznateľnej časti matricovej nukleovej kyseliny. Tieto cykly sa opakujú 30 až 50 krát v súlade so špecifikovaným programom. Konečný produkt tejto reakcie je rozpoznaný gélovou elektroforézou.

Indikátor "citlivosti"

Jedným z najdôležitejších kritérií pre diagnostickú účinnosť akejkoľvek laboratórnej analýzy je indikátor "citlivosti". V tomto prípade je potrebné rozlišovať medzi analytickou a diagnostickou citlivosťou. Analytická senzitivita, pokiaľ ide o PCR, je minimálny počet kópií DNA alebo RNA v 1 ml roztoku vzorky, ktorý sa dá určiť týmto testovacím systémom.

Väčšina komerčných testovacích systémov dokáže detekovať požadovanú nukleovú kyselinu v biologickej vzorke, aj keď jej koncentrácia je niekoľko stoviek kópií v 1 ml vzorky. Ide o všeobecné ustanovenie, ktoré určuje klinickú vhodnosť akýchkoľvek laboratórnych diagnostických metód alebo testovacích systémov - diagnostická citlivosť metódy by nemala byť nižšia ako 95-98%.

Druhým všeobecným kritériom laboratórnej účinnosti je "špecifickosť", ktorá je určená percentom zdravých ľudí, ktorí majú naozaj negatívne výsledky analýzy. Metóda PCR má najvyššiu špecificitu, ktorá dosahuje 99-100%.

Diagnostická senzitivita a špecificita PCR sú porovnateľné a často prevyšujú tie, ktoré poskytujú iné metódy, ktoré sú "zlatým štandardom" v diagnostike infekčných ochorení.

Výsledky PCR analýzy sa dajú získať do jedného pracovného dňa, pričom vzorky odobraté na analýzu sa skladujú (nahromadia) ešte niekoľko týždňov a podliehajú príslušným teplotným štandardom. Nedávne hodnotenie citlivosti rôznych diagnostických metód, ktoré sa nedávno uskutočnilo v niekoľkých zahraničných výskumných strediskách, ukázalo, že test ELISA má citlivosť 50-70% a PCR - od 90 do 100%.

PCR v porovnaní s metódou ELISA a inými metódami má dve dôležité výhody: vysokú citlivosť a krátku časovú analýzu, to znamená "aktuálnosť" získania výsledku štúdie lekárom a pacientom.

Pred inými metódami klinickej laboratórnej diagnostiky sú výhody PCR:

- metóda umožňuje detegovať akúkoľvek DNA a RNA dokonca aj v prípadoch, keď to nie je možné urobiť inými prostriedkami;

- metóda má vysokú špecifickosť (až do 100%). Je to spôsobené skutočnosťou, že v "študovanom materiáli je identifikovaný jedinečný fragment nukleovej kyseliny, ktorý je charakteristický len pre pôvodcu alebo gén;

- možnosť vykonať nielen kvalitatívne (dostupnosť), ale aj kvantitatívne (koncentráciu) hodnotenie obsahu nukleovej kyseliny. V súčasnej dobe, použitím komerčných testovacích systémov, možno v študovanej vzorke určiť niekoľko stoviek kópií;

- vysoká prispôsobivosť a automatizácia metódy umožniť lekárovi získať výsledky štúdie a zoznámiť sa s pacientom v deň analýzy;

- PCR umožňuje identifikovať patogén v tele ešte pred vznikom ochorenia, napríklad v inkubačnom období;

- pre PCR-analýza minimálny objem vzorky (až do niekoľkých mikrolitrov) postačuje;

- PCR analýza umožňuje simultánne diagnostikovať niekoľko patogénov v jednej vzorke bez toho, aby sa ohrozila citlivosť alebo špecifickosť výsledku;

- výsledky PCR môžu byť vložené do počítačových nosičov informácií alebo fotografované na ďalšie hodnotenie nezávislými odborníkmi.

Napriek vyššie uvedeným výhodám metóda PCR stále chýba určité nevýhody, ktoré by sa mali zohľadniť pri hodnotení výsledkov výskumu:

- najvyššie požiadavky na vybavenie laboratória, kvalitu testovacích systémov a prísne dodržiavanie pravidiel výskumu, aby sa zabránilo získaniu falošných výsledkov. Riešenie problému kvality analýz je možné s príslušnou kvalifikáciou zamestnancov a povinnou certifikáciou laboratória;

- nejednoznačné hodnotenie pozitívneho výsledku PCR. Táto skutočnosť je často neprimeraným argumentom odborníkov na pochybnosti o výsledku a účinnosti metódy PCR. Napríklad u jedincov s DNA patogénu, ktorý sa nachádza v krvi metódou PCR, sa choroba nemôže klinicky rozvinúť.

V tejto situácii by sa pri hodnotení analýzy PCR malo hovoriť o infikovanom pacientovi a nie o vývoji infekčnej choroby. Metóda PCR analýzy umožňuje určiť prítomnosť alebo neprítomnosť patogénov, vo veľkej miere reaguje na otázku "liečenia neliečených" a tiež poskytuje príležitosť na posúdenie kvality liečby monitorovaním prítomnosti alebo neprítomnosti patogénu. Lekár, ktorý hodnotí výsledok PCR analýzy, si uvedomuje, že tento výsledok nie je jediným argumentom pri rozhodovaní, či začať liečbu alebo ju odmietnuť.

Pre každý druh, pôvodca vírusovej hepatitídy A testovací systém, ale najcennejšie PCR ukázala diagnózu vírusovej hepatitídy B, C, D, spôsob G. PCR je rozhodujúca pre diagnózu hepatitídy B. To je spôsobené tým, že medzi mnohých variantoch vírusu existujú mutanty (so zmenenými znakmi), ktoré nie sú určené konvenčnými sérologickými testami.

PCR spôsob analýza umožňuje identifikovať, a akákoľvek forma vírusu hepatitídy B je 15, či už je schopný sa replikovať nezávisle alebo integrovaný (vstavaný) v DNA hostiteľskej bunky. To je nesmierne dôležité klinické dôsledky, pretože integratívna forme tejto infekcie osoba nie je nákazlivá pre ostatné (zabezpečenia pre sexuálneho partnera, odbornej spôsobilosti, neexistuje riziko vertikálneho prenosu z matky na plod, a tak ďalej. N.).

Okrem toho sa u takýchto pacientov neukáže antivírusová liečba, navyše - je to dokonca nebezpečné. Súčasne s integrujúcou formou infekcie sa pravdepodobnosť rakoviny pečene prudko zvyšuje (viac ako 200 krát). Takíto ľudia musia absolvovať aspoň raz ročne komplexnú klinickú a laboratórnu a inštrumentálnu skúšku.

Metóda PCR môže slúžiť ako rozhodca na určenie potreby iniciovať liečbu a monitorovať jej účinnosť. Rýchle vymiznutie DNA hepatitídy B z krvi je priamym a spoľahlivým testom úspešného výsledku antivírusovej liečby.

Preto stanovenie HBV DNA v plazme je dôležitým analýza, ktorá v kombinácii s ďalšími laboratórnych testov umožňuje objektívne diagnostikovať infekcie, určiť povahu infekčného procesu, ktorý by slúžil ako kritérium pre terapiu a vyhodnotenie jeho účinnosť.

PCR metóda-Analysis nemá rovnakú diagnózu, prognózu a posúdenie úspešnosti antivírusovej liečby infekcií spôsobených hepatitídy C. Použitie PCR môže detekovať vírus hepatitídy C v počiatočnej fáze infekcie, ako je HCV RNA môže byť detekovaný v sére za týždeň po infekcii. Pomocou tejto metódy sa stanovujú genetické varianty tohto vírusu, ktoré umožňujú lekárovi predpisovať správnu liečbu.

V prípade vírusovej hepatitídy D test PCR umožňuje stanovenie vírusovej RNA v krvnom sére pacienta, ako aj zmiešanú infekciu hepatitídy B a D. Preto sa táto metóda výskumu môže použiť na monitorovanie účinnosti liečby, prognózy priebehu a výsledku ochorenia. Je dôležité, aby lekár zistil, či ide o zmiešanú infekciu, pretože hepatitída D zvyšuje nekrotický účinok na hepatitídu B, a preto zvyšuje riziko jeho vývoja.

Metóda PCR je v súčasnosti jediným spôsobom, ako dokázať prítomnosť infekcie vírusom hepatitídy C.

Zvážte použitie diagnostických metód pre rôzne typy hepatitídy

Hepatitída E. Hlavné diagnostické príznaky vírusu hepatitídy E sú predpokladom vodné transmisný mechanizmus, pacientov vek od 20 do 40 rokov, rozpätie v regiónoch predovšetkým v tropických a subtropických zóny, klinické prejavy, ako je hepatitída A s výskytom mierne, registračné vážnou hrozbou smrti u tehotných ženy v druhej polovici gravidity, prinajmenšom - v ranom popôrodnom období, a dojčiacich matiek (pokračovať intenzívna hemolýzou, hemoglobinúria, akútne zlyhanie obličiek Stu a syndróm ťažký trombus). Potvrďte diagnostiku detekcie protilátok v krvi.

Hepatitída B. Vírusová hepatitída lekári podozrenie, ak chorý 45-180 dní pred nástupom ochorenia transfúziu krvi alebo jej zložiek (erytrocytov, leukocytov, hmotnostné doštičiek) sa vykonáva chirurgický zákrok, štúdie vnútorné, viacnásobné injekcie (vrátane liečiv) alebo že sa stane oveľa menej často v prípade, že pacient mal sexuálne alebo tesnom kontakte s pacientmi s hepatitídou B. kritériá skoré potvrdenie diagnózy je detekčná krv HBs, HBe a HBc antigény a vírusové DNA.

Sérologické markery pre akútnu hepatitídu B

Hepatitída C. Na rozdiel od hepatitídy B, pri ktorej sa pri diagnóze antigénov a markerov protilátok berie do úvahy, u hepatitídy C detekuje ELISA len protilátky, ktoré sú spojené s nízkou koncentráciou vírusu v krvi. Antigény vírusu hepatitídy C sa môžu detegovať v bunkách biopsie pečene.

Laboratórna diagnostika zahŕňa tri hlavné typy testov.

Sérologické markery pre akútnu hepatitídu C

Definícia protilátok. Napriek vysokej špecifickosti, moderné diagnostické systémy imunitného enzýmu nie sú imúnne nadmerne diagnostikované, to znamená pozitívne pozitívne výsledky. Na ich vylúčenie je potrebné aj hodnotenie na základe výsledkov analýz získaných v rôznych časových intervaloch. Falošne negatívne výsledky sú tiež možné, keď nie je možné detegovať antivírusové protilátky napriek prítomnosti vírusu v tele. K tomu dochádza v nasledujúcich prípadoch:

- počiatočné obdobie choroby;

- pri prijímaní pacientov s imunosupresívami - lieky, ktoré potláčajú imunitný systém;

- keď sú infikované určitými genotypmi (najmä 3 a 4).

V súčasnosti sa vyvíjajú komerčné testovacie systémy na detekciu protilátok proti vírusu hepatitídy C prvého genotypu. Takéto testy však nemusia byť dostatočne účinné, aby spoľahlivo detegovali protilátky, keď je infikovaný vírus iného genotypu. To má veľký význam pre regióny, kde prevažujú iné typy vírusov. Pre účinnú diagnostiku hepatitídy C je teda potrebný vysoko citlivý test, ktorý je schopný reagovať s protilátkami proti vírusu hepatitídy C akéhokoľvek genotypu.

Určenie vírusovej RNA. Na diagnostické účely sa vykonáva detekciu RNA vírusu hepatitídy C K dnešnému dňu, tento test je považovaný za "zlatý štandard" pre diagnostiku hepatitídy C. K tomuto účelu sa najčastejšie používa klasický variant polymerázová reťazová reakcia (PCR). S je možné sledovať reprodukciu vírusu, a tiež posúdiť prítomnosť v pečeni a ďalších tkanivách. Stanovenie RNA sa najčastejšie používa pre potvrdenie výsledku detekcie protilátok, predstavujúce včasnú diagnózu akútnej hepatitídy (vírusovej RNA, môžu byť detekované už v 7-21 dní po infekcii, ktorá je dlho pred prvou protilátku), sledovať tehotnú perinatálnej infekcie a monitorovanie účinnosti antivírusovej liečby.

Údaje z týchto dvoch analýz sa navzájom dobre dopĺňajú. Pozitívne výsledky PCR analýzy v kombinácii s negatívnymi výsledkami na antivírusové protilátky sú charakteristické pre niektoré obdobia akútnej hepatitídy. Negatívne PCR analýzy na pozadí pozitívnych testov na protilátky môžu byť spôsobené nízkou (nie zachytenou v PCR) koncentráciou vírusu v krvi. Opakované pozitívne PCR krvné testy odrážajú aktiváciu vírusu v bunkách pečene alebo iných orgánov.

PCR sa tiež používa na detekciu vírusu v pečeňovom tkanive získanom z biopsie. To poskytuje úplnejšie informácie o vývoji infekčného procesu, pretože vírus je schopný dlhodobo zostať v hepatocytoch bez toho, aby sa dostal do krvi alebo bol v ňom prítomný v nízkych koncentráciách. To sa často vyskytuje v počiatočných štádiách infekcie, ale pozoruje sa aj pri chronickej hepatitíde.

Stanovenie proteínov (antigény) z vírusu hepatitídy C. Teoretická možnosť detekcie proteínov vírusu hepatitídy C vznikla krátko po objavení vírusu študovanej imunofluorescenčný tkanív odobratých z pečene u pacientov s chronickou hepatitídou C ľuďmi a šimpanzy, infikovaných vírusom.

Určenie vírusových proteínov (antigénov) v krvnom sére z dôvodu ich nízkeho obsahu nebolo možné dlhšiu dobu. Len nedávno boli vyvinuté metodické prístupy k detekcii vnútorného C-proteínu v krvi imunitným enzýmom a bola zorganizovaná výroba prvých komerčných testovacích systémov. Ich zavedenie do praxe umožní riešenie sporných diagnostických problémov na ekonomickejšom základe ako určenie vírusovej RNA. Stanovenie hladín ALT je najlacnejšou metódou hodnotenia prietokovej aktivity hepatitídy C. Avšak získané údaje nemusia stačiť na určenie závažnosti ochorenia.

Dôležité informácie o poškodení pečene možno získať určením koncentrácie ALT niekoľko mesiacov. Ak chcete získať informácie o stupni poškodenia pečene, ktorý nie je dostupný v iných metódach vyšetrovania, môžete poskytnúť lekárovi biopsiu pečene. Údaje získané v dôsledku tohto postupu umožňujú rozhodnúť v prospech iniciácie alebo zrušenia antivírusovej liečby.

Článok využíva materiály z otvorených zdrojov: Autor: S. Trofimov - Kniha: "Choroby pečene"