Diagnóza hepatitídy zahŕňa celý komplex testov na určenie prítomnosti vírusu v krvi. Jedným zo spôsobov, ako zistiť ochorenie, je metóda PCR ako reakcia na hepatitídu C. Čo je to dôvod, prečo je PCR analýza hepatitídy taká dôležitá, ako sa vykonáva a dekóduje?

Čo je to?

Polymerázová reťazová reakcia alebo PCR sa používa na diagnostiku žalúdočných vredov, kolitídy, enteritidy. Jeho hlavnou výhodou je, že pomáha detegovať v tele samotný samotný vírus hepatitídy C a protilátky proti nemu, ktoré majú schopnosť spôsobiť, že imunitný systém nereaguje kvôli svojej schopnosti mutovať.

Štúdiou a jej podstatou je vytvoriť určité podmienky, v ktorých dochádza k reakcii reťazca hepatitídy RNA. Ak sa v porovnaní s nukleotidovou sekvenciou vírusu hepatitídy C zistí náhoda, znamená to, že v krvi sú vírusové častice a rozpad sa vyskytuje v pečeni. Ak je množstvo vírusu pod určitou úrovňou, urobí sa negatívna diagnóza, ak je vyššia - pozitívna.

Existujú dva typy krvných testov s použitím metódy PCR na hepatitídu: kvantitatívna analýza a kvalitatívna analýza.

Kvantitatívna PCR, ako je uvedené vyššie, určuje koncentráciu RNA vírusu hepatitídy. Okrem toho je schopný poskytnúť informácie o intenzite, s akou sa patológia vyvíja a o účinnosti predpísanej liečby. Kvantitatívna analýza hepatitídy C je mimoriadne dôležitá, pretože stanovuje odolnosť voči antivírusovým liekom a umožňuje upraviť liečbu.

Po ukončení liečby pacientom pomáha PCR pri určovaní ďalšieho poradia predpisov. V niektorých prípadoch sú potrebné ďalšie prieskumy. Napríklad, ak je hladina ALP zvýšená (ale nie viac ako 2 krát za pol roka) a analýza indikuje vírusové zaťaženie nad 105 IU / ml, pacientovi bola pridelená biopsia. Ak kvantitatívna analýza PCR zistí silný zápal a fibrózu, pacientovi sa predpíše liečebný postup s antivírusovými liekmi.

V situáciách, v ktorých je veľký počet vírusových častíc kombinovaných s vysokým ALT, musí byť pacient okamžite liečený bez ďalších diagnostických opatrení.

Vykonajte tento test a zistite, či máte problémy s pečeňou.

Kvalitatívnu interpretáciu ukazovateľov kvantitatívnej analýzy krvi na hepatitídu môžu kvalifikovaní a skúsení odborníci a moderná technológia to pomáha pri nízkych koncentráciách vírusu v krvi.

Kvalitatívna PCR analýza je zameraná na určenie a potvrdenie skutočnej prítomnosti vírusu v tele. Vykonáva sa s detekciou protilátok proti hepatitíde v krvi. Ide o kvalitatívne test na hepatitídu zaručiť presnosť výsledku o 100% a umožňuje diagnostikovať v skorých štádiách ochorenia, čo umožňuje bojovať proti hepatitíde B počas prvých týždňov po infekcii a zvyšuje šance na úplné vyliečenie (v prípade ochorenia typu B).

Výhody PCR

Pri skúmaní metódy PCR a dešifrovaní krvného testu na hepatitídu je tiež možné určiť genotyp pôvodcu ochorenia. Existuje 6 genotypov vírusu a veľké množstvo podtypov, ale v našom regióne je distribúcia 1, 2 a 3 genotypov.

Ďalšie výhody tohto typu diagnostiky sú:

• Vysoká presnosť prijatých indikátorov a nízka pravdepodobnosť chýb v nich;
• vysoká citlivosť na vírusové častice v krvi;
• možnosť detekcie viacerých patogénov;
• diagnostika patogénnych intracelulárnych mikroorganizmov, ktoré majú vysokú antigénnu variabilitu;
• práca s dekódovaním analýzy hepatitídy umožňuje zistiť latentné prúdové infekcie.

Komu vymenúva

Analýza PCR pre hepatitídu nutne zahŕňa nasledujúce kategórie ľudí:

• tehotné ženy;
• zamestnanci zdravotníckych zariadení;
• potenciálnych darcov krvi a orgánov;
• tých, ktorí majú charakteristické príznaky choroby;
• HIV-infikované osoby;
• drogovo závislých;
• osoby vedúce promiskuitný sexuálny život.

Ako sa vykonáva analýza a vyžaduje sa odborná príprava?

Vzorky krvi na PCR sa vykonávajú z žily. Zvyčajne to nastane ráno, kým osoba jedla, pretože po jedení musí prejsť minimálne 8 hodín. V extrémnych prípadoch môže byť krv odobratá na vyšetrenie denne alebo večer, ale časová medzera medzi analýzou a príjmom potravy by mala byť aspoň 5 hodín.

Ľudský faktor sa môže vo výsledkoch kvantitatívne odzrkadliť: ich presnosť sa v niektorých prípadoch znižuje zo 100% na 95%, preto je nevyhnutné pripraviť na dodávku krvi vopred. Kvalita biomateriálu na analýzu bude vhodná, ak pacient dodržia tieto pravidlá:

• Pred dávaním krvi môžete piť len čistú vodu;
• počas dvoch dní predtým, ako by sa štúdie odmietla prijímať vyprážané a mastné potraviny, ako aj alkoholické nápoje;
• deň pred návštevou laboratória prestať užívať lieky. V prípade, že to nie je možné, je absolútne nevyhnutné upozorniť ošetrujúceho lekára a ošetrujúceho lekára;
• v predvečer stresových situácií a fyzickej námahy;
• Neprechádzajte pomocou ultrazvukových, rádiologických a inštrumentálnych štúdií krátko pred odberom krvi;
• hodina pred analýzou by sa mala zdržať fajčenia;
• 20 minút pred dodaním krvi treba rozptýliť, uvoľniť a dokonca dýchať.

Ak test vykoná dieťa mladšie ako 5 rokov, rodičia by mali zabezpečiť, aby pili varenú vodu každých 10 minút počas pol hodiny pred odberom vzoriek biomateriálu.

Vysvetlenie prijatých údajov

Analýzu možno prezentovať slovom (v prípade kvalitatívneho výskumu), napríklad "nenájdený" alebo "pod rozsahom zmien". V prvom prípade to znamená, že infekcia nebola zistená. V druhej - že je prítomný vírus, ale v malom množstve. Táto situácia si vyžaduje opätovné preskúmanie.

Vírusová záťaž je určená množstvom infekčnej RNA a je označená ako ME / ml alebo kópie / ml.

Normálny ukazovateľ (norma) kvantitatívnej analýzy hepatitídy C je rozsah od 1,8 x 102 do 2,4 x 107 IU / ml.

Koncentrácia vírusu v krvi môže byť:

• nízka: od 600 IU / ml do 3x104 / ml;
• priemer: od 3x10 4 IU / ml do 8x10 5 IU / ml;
• vysoká: viac ako 8x10 5 IU / ml.

Kvantitatívna a kvalitatívna analýza PCR pre hepatitídu umožňuje určiť prítomnosť vírusu v tele a úroveň jej koncentrácie. Polydizovaná reťazová reakcia je schopná diagnostikovať ochorenie už v počiatočnom štádiu, ale na to je potrebné, aby pacienti čo najskôr kontaktovali lekárske inštitúcie o pomoc a prísne dodržiavali odporúčania lekára.

Použitie diagnostiky PCR

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) v molekulárnej biológii sa nazýva experimentálna metóda detekcie vírusov. Umožňuje významne zvýšiť koncentráciu určitých fragmentov nukleovej kyseliny (DNA) vo vzorkách biologického materiálu, čo umožňuje určiť (rozpoznať) a spočítať ich.

Analýza sa uskutočňuje nasledovne. Genetický materiál (vzorka krvi), ktorý potenciálne môže obsahovať požadovaný gén, sa zavedie do skúmavky. Aj tam sú umiestnené priméry - chemicky syntetizované malé dĺžky požadovaného génu.

Do nádoby sa tiež pridá DNA alebo RNA polymeráza, je schopná vytvoriť reťazec nukleovej kyseliny, ktorý je úplne identický s pôvodným reťazcom. Súbor štyroch voľných nukleotidov, špeciálny stavebný materiál pre RNA alebo DNA, z ktorých jedna obsahuje rádioaktívne častice fosforu, sa tiež zavádza do výslednej kompozície.

Výsledná zmes sa zahreje na 95 až 96 ° C, kvôli ktorému sa rozdelia obidve DNA helixy, ktoré sa previažu v bežnom stave. Potom sa prípravok ochladí, v tomto čase sa priméry pripojí k požadovanej oblasti vírusového genómu, bez toho, aby RNA (alebo DNA) opäť vytvorila dvojitú špirálu.

Počas chladenia polymeráza vyhľadáva voľný reťazec nukleotidov. Pre fungovanie tohto enzýmu je potrebný jeden reťazec nukleotidov. Pretože polymeráza klesá pozdĺž reťazca DNA (ako krúžok lano), nemôže fungovať na dvojitej špirále.

Potom sa uskutočňuje opakovaný cyklus zahrievania, kvôli ktorému sú nukleotidové reťazce oddelené. Pri každom z týchto cyklov PCR sa množstvo požadovaného génu pre hepatitídu vo vzorke zvyšuje v geometrickej progresii a zvyšok genetického materiálu sa produkuje lineárne.

Po purifikácii roztoku nukleotidových zvyškov a oddelení reťazcov DNA parametrom molekulovej hmotnosti od elektroforézy je ľahké určiť, či požadovaný gén existuje v testovanej vzorke alebo nie.

Výhody PCR

Laboratórna štúdia používajúca metódu PCR umožňuje získať ešte viac informácií ako len prítomnosť RNA vírusu. Pri určovaní parametra úrovne rádioaktívneho žiarenia je možné určiť, aké množstvo genetického materiálu bolo na začiatku obsiahnuté v skúmanej vzorke. V prípade hepatitídy určte úroveň vírusovej záťaže.

Ďalšou výhodou tejto metódy je veľmi vysoká citlivosť CR reakcie. Je oveľa vyššia ako klasické metódy na detekciu vírusov. V ideálnom prípade, aby sa identifikoval požadovaný gén, stačí iba jeden vírus vo vzorke na PCR.

Okrem toho je PCR úplne špecifická. Jeho priméry sú vytvorené tak, aby úplne zodpovedali jedinečným častiam požadovaných génov, ktoré žiadna iná sekvencia nemá. Oba odtlačky prstov sú jedinečné a v každom géne existujú jedinečné sekvencie nukleotidov.

Kvalitatívna analýza PCR

Kvalitatívna analýza odhaľuje iba prítomnosť vírusu v krvi. Tento test sa má vykonať u všetkých pacientov, u ktorých sa zistilo, že majú v krvi protilátky na hepatitídu C. Výsledok môže byť len jedna z dvoch hodnôt: "zistená" alebo "nezistená". U zdravého človeka by norma (referenčná hodnota) mala byť "nezistená".

Existuje aj špeciálna interpretácia takýchto výsledkov uskutočneného kvalitatívneho výskumu:

• Výsledok je "objavený". To znamená, že vo vzorke biologického materiálu, s ktorým bolo nájdené RNA fragmentu, ktorý je špecifický pre vírusu hepatitídy C V dôsledku toho je skutočnosť, že u pacienta s infekciu vírusom hepatitídy B s C-je výsledok kvalitatívnej PCR je "objavil", znamená to, že vírus opakovanie a v tomto čase infikuje nové pečeňové bunky v tele.
• Výsledok je "nezistil". Takéto rozhodnutie ukazuje, že vo vzorke biologického materiálu získaný fragment RNA nie je v laboratóriu, ktorá je špecifická pre HCV RNA buď rovnakej koncentrácii patogénu infekcie vo vzorke bola pod hranicou citlivosti testu detekovaný.

V akútnej fáze RNA vírusu hepatitídy C sa môžu kvalitatívne štúdie s použitím PCR techniky odhaliť po 1-2 týždňoch bezprostredne po infekcii tela, tj dlho pred vznikom protilátok proti samotnej hepatitíde.

Nespoľahlivé výsledky analýz takéhoto vyšetrovania je možné získať s:

• kontaminovaný biomateriál;
• prítomnosť heparínu v krvi pacienta;
• prítomnosť vo vzorke chemických alebo bielkovinových látok (inhibítorov), ktoré ovplyvňujú rôzne zložky PCR.

Pre kvalitatívnu analýzu PCR nie je potrebná špeciálna príprava pacienta na štúdium. Venózna krv sa používa ako materiál.

Hodnotenie výsledkov

Kvalitatívne PCR testy majú určitý stupeň citlivosti a v závislosti od presnosti výskumu a úroveň vybavenia v laboratóriu môže kolísať medzi 10 a 500 IU / ml.

To znamená, že ak je vírus vo vzorke krvi prítomný vo veľmi nízkej koncentrácii (menej ako prahová citlivosť daného laboratória), pacienta pacienta sa môže zistiť ako "nezistené". Z tohto dôvodu, pri vykonávaní kvalitatívnu analýzu PCR s nízkou úrovňou virémie (vírus nízka koncentrácia), napríklad u pacientov, ktorí podstúpili liečbu antivírusovej terapie, je dôležité poznať, a prah citlivosti diagnostického systému.

Varianty diagnostických systémov

Na kontrolu virologickej odpovede sa odporúča používať antivírusovú liečbu na použitie diagnostických systémov s prahom citlivosti najmenej 50 IU / ml. Tieto kritériá sú splnené, napríklad: analyzátory COBAS Ampicolor HCV test (c presnosť 50 IU / ml) a RealBest HCV RNA (s citlivosťou 15 IU / ml).

Podľa odporúčaní WHO pre vytvorenie konečnej diagnóze hepatitídy C, musí byť založené iba na základe trojitého detekcie RNA vírusu vo vzorkách séra od pacienta so žiadnymi inými druhmi hepatitídy markeru.

Okrem metód PCR sa na odhaľovanie HCV RNA u pacientov používa štúdia TMA (metóda transkripčnej amplifikácie). Má najvyššiu hranicu citlivosti (5-10 IU / ml), ale v našej krajine táto metóda testovania ešte nie je veľmi obvyklá.

Rozsah zistených zmien vírusov

Toto kvalitatívne stanovenie prítomnosti RNA vírusu hepatitídy C v sére umožňuje určiť niekoľko genotypov tohto vírusu. V súčasnej dobe veda vie viac ako šesť genotypov tohto vírusu, rovnako ako asi 10 subtypov choroby.

Vírusy s 1, 2, 3 genotypmi sú v našej krajine bežné. Laboratóriá môžu identifikovať nasledujúce genotypy: 1a a 1b, 2a, 2b a 2c, a 3, 4, 5a a 6 bez ohľadu na podtypy. Pri všetkých vírusových modifikáciách je špecifickosť detekcie 100%.

Kvantitatívna analýza PCR

Pomocou kvantitatívneho PCR testu sa určí koncentrácia vírusu hepatitídy v krvných vzorkách (vírusová záťaž). Tento test virémie (koncentrácia vírusu) vám umožňuje určiť počet jednotiek špecifického genetického materiálu (najviac vírusovej RNA), ktorý sa deteguje v určitej miere. V tomto prípade určte jeho koncentráciu v 1 ml, čo zodpovedá 1 cu. cm.

Kvantitatívne parametre analýzy sú vyjadrené v číslach pre toto použitie ako jednotky merania medzinárodných jednotiek (IU) na mililiter (ml), označené ako ME / ml. Teraz v niektorých laboratóriách možno množstvo vírusu stanoviť v iných jednotkách: počet kópií na ml je označený ako kópie / ml.

• Načasovanie: pre hepatitídu C sa takáto kvantitatívna analýza PCR vykonáva tesne pred začiatkom liečby. Potom na 1., 4., 12. a 24. týždni. Hodnotenie v 12. týždni je orientačné, umožňuje určiť účinnosť terapie.
• Príprava na analýzu. Pri kvantitatívnej analýze PCR sa nevyžaduje špeciálna príprava pacienta na štúdium. Polhodinu pred odberom vzoriek by ste nemali fajčiť. Venózna krv sa používa ako laboratórny materiál.

Hodnotenie výsledkov

V prípade rôznych laboratórnych testovacích systémov existujú pre tento ukazovateľ rôzne konverzné faktory v IU / ml. V priemere sa používa konverzný parameter, v ktorom sú 4 kópie / ml = 1 IU / ml. To znamená, že ak laboratórium dáva výsledok PCR analýzy 2,4 * 10 6 kópií / ml, potom by tento parameter mal byť rozdelený na 4 a dostaneme 6 x 105 5 IU / ml.

Úroveň vysokého zaťaženia 800 000 IU / ml sa považuje za vysokú, čo je približne ekvivalentný indexu 3 000 000 kópií / ml. Nízka virémia podľa niektorých autorov zodpovedá parametrom kvantitatívnej PCR pod 400 000 IU / ml.

V dôsledku kvantitatívneho testu sa konečné výsledky dajú dodať nie vo forme digitálnej hodnoty, ale: "pod meracím rozsahom" alebo "nezistené".

• Vyhodnotenie: "pod meracím rozsahom". To naznačuje, že kvantitatívny test nezaznamenal vírusovú RNA vírusu hepatitídy C, ale samotný vírus je v tele prítomný vo veľmi malých koncentráciách. Toto je indikované dodatočným kvalitatívnym testom, ktorý potvrdzuje prítomnosť vírusu.
• Hodnotenie: "nezistené". Tento výsledok naznačuje, že kvantitatívny test nezistil vírus vo vzorke RNA.

Parameter vírusovej záťaže určuje najprv stupeň infekčnosti choroby, úroveň "infekčnosti" pacienta. Čím vyššia je koncentrácia vírusu pacienta, tým väčšia je pravdepodobnosť jeho prenosu na iné osoby. Napríklad, ak máte sex s chorým človekom, alebo vertikálna cesta. Takýto kvantitatívny indikátor tiež pomáha určiť účinnosť liečby pacienta.

Vykonávanie kvantitatívnej analýzy PCC je dôležité pre antivírusovú liečbu, hodnotenie jej úspechu a plánovanie trvania kurzu. Takže s rýchlou odpoveďou tela na liečbu a nízkym stupňom virémie sa dĺžka liečby môže znížiť.

Pri pomalom znižovaní kvantitatívneho parametra PCR by sa antivírusová liečba mala rozšíriť alebo upraviť. Ak je úroveň vírusovej záťaže nízka, potom je to priaznivý faktor liečby, ak je vysoká, potom je aplikovaná metóda liečby neúčinná a lieky alebo spôsoby ich použitia by sa mali zmeniť.

Diagnostika s hepatitídou C s PCR

Nie každý vie, ktoré používajú diagnostické metódy PCR pre hepatitídu C. Jedným z najčastejších skupín ochorení sú infekčné ochorenia gastrointestinálneho traktu. Najčastejšie trpí žalúdka (vredy), hrubého čreva (kolitída, enteritídou) a pečene (hepatitída).

Na pečeni medzi všetkými vyššie uvedenými orgánmi je priradené najväčšie zaťaženie. V tele je úloha pečene mimoriadne dôležitá:

1. Takmer všetky metabolické reakcie sa vyskytujú v pečeni (tu sú všetky dôležité zložky, ktoré umožňujú telu úplne fungovať).
2. Pečeň je hlavným orgánom, ktorý vykonáva detoxifikačnú funkciu. Pomocou (najmä prostredníctvom žlče) sa odstránia mnohé substráty, ktoré môžu spôsobiť intoxikáciu a viesť k vážnym následkom.

Bohužiaľ, mnohí ľudia nedodržiavajú svoje zdravie, pretože pečeň začne trpieť. Zvyčajne sa objavuje hepatitída rôznej etiológie (vírusová, toxická).

Definícia hepatitídy

Vírusová hepatitída zaujíma dôležité miesto medzi ochoreniami pečene. Závažnosť priebehu ochorenia, zložitosť liečby, z nich robí prvú patológiu inej povahy tohto orgánu.

Všetky hepatitídy sú rozdelené na akútne a chronické. Akútne prenášať hepatitídu A a B. Medzi chronické na prvom mieste je hepatitída C.

Toto ochorenie je spôsobené vírusom hepatitídy C. Charakteristickým znakom je, že ochorenie môže trvať dlhú dobu bez akýchkoľvek klinických prejavov.

Vysiela sa hlavne krvou. S prietokom krvi vírus vstupuje do pečene, kde sa začne množiť vo svojich bunkách. Výsledkom akumulácie viriónov je deštrukcia infikovaného hepatocytov. Ako odpoveď sa začínajú produkovať protilátky, ktoré začnú napadať pozostatky hepatocytov. Z tohto dôvodu je v priebehu času vytvorený bazén proti bunkám pečene, čo zhoršuje priebeh ochorenia.

Vzhľadom k tomu, že choroba je malosimptomno alebo asymptomatické, a klinické príznaky sa objavujú iba vtedy, keď významné poškodenie buniek, toto ochorenie vyžaduje vytvorenie diagnostických metód pre detekciu jeho prítomnosť a podniknúť príslušné kroky.

Diagnóza hepatitídy C: kvalitatívne a kvantitatívne analýzy

V súčasnosti sa na diagnostiku hepatitídy C používajú také metódy ako biopsia pečene, imunogram.

Umožňujú priamo určiť prítomnosť postihnutých hepatocytov (štúdie biopsie pečene) alebo špecifické protilátky proti infikovaným bunkám (imunogram). Existuje však metóda, ktorá dokáže spoľahlivo určiť prítomnosť samotného vírusu. Táto PCR je polymerázovou reťazovou reakciou.

Podstata tejto metódy spočíva v tom, že za určitých podmienok dochádza k vývoju reťazcov RNA. Je to spôsobené tým, že v krvi alebo vo vzorke biopsie sú fragmenty vírusovej častice. Keď sú v kombinácii s niektorými molekulami v médiu, dochádza k syntéze reťazcov komplementárnych s vírusovou RNA. V ich následné analýzy a porovnania so známym nukleotidovej sekvencie HCV je možné určiť, či je vírus v tele a či je poškodenie pečene je prítomný.

PCR sa uskutočňuje po detekcii špecifických protilátok proti vírusu hepatitídy v krvi. Po vykonaní testu sa výsledok vykreslí - RNA "zistí" alebo "nezistil sa". Občas môže povedať "nedostatok materiálu" - v tomto prípade opakovaná analýza pre hepatitídu C.

Ak je počet vírusových častíc je menšia, ako je požadovaná minimálne množstvo, potom môžeme hovoriť o tom, že proti hepatitíde B nie je prítomný, a minimálne množstvo genetického materiálu by mohla byť "zameniť", pretože mimikry genetického materiálu, alebo niektoré sekvencie nukleotidov, ktoré šance mohol zhodovať s tým vírusu.

1. PCR negatívne výsledky môžu byť, ale v skutočnosti sú vírusové častice v krvi, ale sú tak malé (infekcia v poslednej dobe došlo alebo analýza predchádzalo dlhé a intenzívne antivírusovej terapie), že testovací systém jednoducho nebol schopný správne stanoviť ich koncentráciu. RNA - "nezistil sa".
2. V prípade, že PCR je pozitívny, vírusové častice v krvi je toľko, že ich počet prekročí spodná hranica citlivosti testovacieho systému. V tomto prípade je riziko vzniku infekčného procesu vysoké (alebo je už prítomné v pomerne zanedbanom štádiu). Zvyčajne vysoké množstvo vírusu je už indikáciou na liečbu a následnú transplantáciu pečene.

Niekedy sa test môže stať falošne pozitívnym alebo falošne negatívnym.

Falošne negatívne HCV PCR pozorovať v prípade, že médium pre reakciu sa tu sú niektoré zložky, ktoré inhibujú vytváranie kópií vírusových častíc. Z tohto dôvodu nie je možné získať pravdivý obraz o stave krvi, ktorá pomáha prechádzať progresiu vírusu a choroby. Reakcia môže byť ovplyvnená, a prítomnosť heparínu v krvi (znížením relatívnej viskozitu krvi). Nesprávna interpretácia analýzy je možná aj vtedy, keď neboli splnené podmienky na prepravu a skladovanie skúšobného materiálu.

Falošne pozitívne výsledky, keď je diagnostikovaná hepatitída C, sa najčastejšie vyskytuje pri kontaminácii skúmavky alebo pracovného média. Okrem toho sa môžu pozorovať pozitívne výsledky v prítomnosti a vírusov hepatitídy iných skupín (v dôsledku krížovej reakcie).

Kvalitatívna analýza PCR na detekciu hepatitídy C

Prítomnosť veľkého množstva kryoglobulínov v krvi tiež priamo ovplyvňuje priebeh PCR. Z tohto dôvodu sa pred testovaním na hepatitídu C, je nutné určiť ich koncentrácia v krvi k detekcii skresleniu výsledku vopred a zabrániť.

Po vykonaní špecifikovaných testov je jasné, či sú prítomné častice krvného vírusu. Keď sú definované, odporúča sa okamžite začať s antivírusovou liečbou, aby sa spomalil postup procesu. Na rozdiel od hepatitídy B nie je úplná liečba hepatitídy C; choroba prechádza len do latentnej fázy a začína plynúť pomalšie. Porážka pečene je nevyhnutná. V poslednom štádiu procesu, keď už pečeň nespĺňa svoju funkciu, môže byť potrebné transplantovať.

Liečba sa vykonáva hlavne dvomi liekmi - interferónom a ribavirínom.

Zistila sa ich účinnosť pri spomalení procesu poškodenia hepatocytov. Medzitým je potrebné podávať infúznu terapiu, aby sa uľahčila práca pečene.

Všetci pacienti, u ktorých došlo k nárastu počtu vírusových častíc v krvi, sú nevyhnutne na základe hepatológov. Niekoľkokrát do roka sa odporúča, aby sa podrobili preventívnemu vyšetreniu, aby sa určil priebeh procesu a včasná detekcia indikácií na transplantáciu. Okrem toho môžete použiť aj hepatoprotektory, hoci názory lekárov sú trochu rozdielne. Niektorí veria, že tieto lieky môžu zastaviť proces a ochrániť nezhorené hepatocyty; Iní sú presvedčení, že nemá zmysel pri ich užívaní a že by mala byť vykonaná intenzívna antivírusová liečba.

Hepatitída C teda patrí do kategórie chorôb, ktorých odhalenie predstavuje určité ťažkosti. Zlepšenie diagnostických metód, ako aj včasné preventívne vyšetrenia znižujú výskyt tejto choroby. Je tiež dôležité zabrániť tejto chorobe. Dôkladne sa vyhýbajte kontaktu s krvou, odmietajte užívať lieky, až potom sa táto choroba odstráni. Hlavnou vecou prevencie a liečby je pacientov vedomý postoj k jeho zdraviu.

Dekódovanie analýzy PCR pre hepatitídu C

Špeciálna laboratórna štúdia - analýza hepatitídy C ptsr - významne zjednodušuje diagnostiku tohto vírusového ochorenia. Výnimka nie je a hepatitída C. Malá vzorka krvi môže byť skontrolovaná na obsah RNA a iného genetického materiálu vírusového činidla. Analýza pomocou PCR uskutočňujú všetky osoby s protilátkami proti hepatitíde C, ktoré cirkulujú v krvnej plazme, ktorých prítomnosť potvrdila kvalitatívnu detekciu.

Interpretácia výsledkov je interpretovaná v grafe výskumného formulára ako "pozitívna" alebo "negatívna" analýza. Navyše pomocou PCR je možné nielen kvalitatívne určiť minimálny obsah vírusu, ale aj spočítať počet častíc. Preto je možné určiť odhadovanú vírusovú záťaž a určiť čo najpresnejšie lekársku taktiku liečby.

Vírusové poškodenie pečene

Pečeň ako prvok zažívacieho traktu má veľké zaťaženie. Vo svojich bunkách prebieha väčšina metabolických reakcií všetkých typov metabolizmu, čo zabezpečuje optimálne fungovanie všetkých orgánov a systémov. Jeho detoxikačná hodnota je zároveň vynikajúca na odstraňovanie trosiek a produktov metabolizmu fermentačnou žlčou.

Porážka pečene vírusmi rôznej povahy je extrémne nebezpečná pre orgán. Rôznorodý klinický obraz a nedodržiavanie liečby hepatitídou vedie k prvému miestu z hľadiska zdravotných rizík. Hepatitída C je chronická a môže dlhodobo priniesť negatívny výsledok testu a pomaly parazituje ľudské telo. Vírus je prenášaný prostredníctvom biologických tekutín: krvi a menej často prostredníctvom spermií. Narkotické zneužívanie nesterilných striekačiek, prirodzené dodávanie nakazených žien, náhodné poranenia alebo škrty zdravotníckych pracovníkov môžu viesť k prenosu vírusu zdravým ľuďom.

Včasnú diagnostiku ochorenia bráni skrytý klinický obraz a nesystematická patológia. Pozitívny výsledok možno jednoducho vynechať zlé testy kvality. Iba významná lézia pečeňových buniek spôsobuje určitú symptomatológiu, avšak negatívny účinok viremie v tom čase nemá žiadnu šancu obnoviť orgán.

Moderná medicína vyvinula špeciálne metódy na rozpoznanie najmenšej stopy vírusu. PCR, ak je biopsia pečene schopná zistiť najmenšie poškodenie pečene a minimálnu hladinu protilátok proti vírusu. Analýza pomocou PCR je najjednoduchšia a najspoľahlivejšia v diagnostickej praxi.

Kvalitatívna analýza

Podstatou polymerázovej reakcie je vývoj sekvencie RNA. Reakcia sa vykonáva, keď sú v krvnej plazme rovnaké vírusové proteíny.

Špeciálne katalyzátory umožňujú syntetizovať podobnú sekvenciu vírusového reťazca, ktorá sa porovnáva so známymi nukleotidmi vírusovej RNA. Na základe toho sa určuje vírusová záťaž a poškodenie pečene.

PCR je schopná detegovať aj jedinú prítomnosť požadovaného génu v krvi. Táto diagnostická reťazová reakcia je tiež veľmi špecifická. Sekvencia nukleotidových reťazcov je jedinečná pre každé stvorenie, takže enzymatické priméry vytvárajú identické sekvencie požadovanej genetickej informácie. Takže každý vírus môže byť detegovaný s najmenšou presnosťou, aj keď jeho kvantitatívny index je extrémne malý.

Pacienti, v ktorých krvi boli vyvinuté protilátky proti vírusovej hepatitíde, vykonali kvalitatívnu štúdiu ptsr alebo ifa. Výsledok analýzy môže byť buď pozitívny alebo negatívny, čo v oboch prípadoch vyžaduje liečbu.

Dešifrovanie pozitívnej reakcie reťazovej reakcie nasleduje ako prítomnosť fragmentov RNA vírusu hepatitídy alebo ako fenomén infekcie.

V krvnej plazme sa v súčasnosti vírus aktívne množí a parazituje pečeňové bunky. Diagnostika PCR môže poskytnúť negatívnu odpoveď, ak sú častice vírusovej RNA prítomné v plazme trochu pod úrovňou citlivosti testu alebo vôbec žiadne. Po priamej infekcii rastie množstvo vírusu relatívne pomaly a až po 1 až 2 týždňoch, ak ich možno rozlíšiť, akýkoľvek iný kvalitatívny výskum.

Negatívnu analýzu je možné získať v nasledujúcich prípadoch:

1. Pri odoberaní materiálu za nevhodných podmienok, získanie vzorky krvi s kontamináciou;
2. Pri predchádzajúcich injekciách pacientov s heparínom.
3. Ak sú v odoberaných vzorkách prítomné ďalšie enzýmy a substráty, ktoré narušujú priebeh reťazovej reakcie.

Kvantitatívna analýza

Kvantitatívny test ako mikrobiologická diagnóza je určený na stanovenie vírusovej záťaže. Potvrdená kvalitatívna analýza virémie je základom pre stanovenie množstva genetického materiálu a jeho koncentrácie. Počet detegovanej vírusovej RNA sa stanoví v jednotke objemu krvi, zvyčajne v 1 mililitroch. Požadované materiály sú vyjadrené v medzinárodných jednotkách, niektoré laboratóriá v analýze ifa používajú počet kópií.

Zvyčajne sa uskutočňuje kvantitatívna analýza PCR pred akýmkoľvek terapeutickým režimom. Vírusové RNA sa často počítajú dostatočne: po jednom, štyroch, dvanásť a dvadsaťštyri týždňoch. 12. týždeň sa považuje za indikatívny, pretože na základe analýzy počas tohto obdobia sa uskutočňuje dekódovanie účinnosti lekárskych opatrení.

Kvantitatívna analýza pomocou PCR alebo ifa zahŕňa odber vzoriek z žily.

Interpretácia výsledkov ako vysokej vírusovej záťaže začína počtom 800 000 IU / ml. Takýto pozitívny výsledok pre hepatitídu C odráža prítomnosť najmenej 3 000 000 kópií v jednom mililitri krvi. Nízka hladina viremie sa zastaví na čísle 400 000 IU / ml. Výsledky štúdie môžu byť hodnoty ako negatívna odozva, rovnako ako "pod meracím rozsahom".

Kvantitatívny test s odhadom "pod meracím rozsahom" hovorí, že reakcia nedokázala vypočítať RNA. Vírus cirkuluje v tele, ako naznačuje pozitívny kvalitatívny test. Negatívny indikátor kvantitatívnej analýzy ptsr alebo ifa indikuje neprítomnosť RNA v tejto krvi.

Napriek obmedzeným spôsobom prenosu vírusu krvou sa zvyšuje riziko prenosu vírusu cez tajomstvo pohlavných žliaz z matky na dieťa.

Kvantitatívna analýza poskytuje významnú pomoc pri hodnotení terapeutických zásahov. Ifa a ptsr odrážajú účinok antivírusových liekov, pomáhajú stanoviť načasovanie terapie a posúdia tvorbu imunity u pacientov. Skorá negatívna odpoveď z laboratórnych testov naznačuje úspešnú liečbu a potrebu skrátiť trvanie liečby. Pomalé zníženie miery virémie sa môže dešifrovať ako potreba zmeniť terapeutický priebeh. Úroveň vírusovej záťaže určuje prognózu ochorenia. Hepatitída s nízkou frekvenciou je pravdepodobne jednoducho liečená a môže úplne odstrániť vírus z tela. Vysoká miera prítomnosti vírusu v krvi vyžaduje pozornú liečbu a všestrannú liečbu.

Kvalitatívna analýza hepatitídy C

Nechajte odpoveď

Kvalitatívna analýza polymerázovej reťazovej reakcie - PCR pre hepatitídu C určuje prítomnosť alebo neprítomnosť HCV v tele. V laboratóriu sa študuje štruktúra RNA, v ktorej sa nachádza vírus. Ak je detegovaný vírus C, je potrebné podstúpiť liečbu, pretože zanedbané pečeňové ochorenie má vážne dôsledky. Kvalitačná PCR sa vykoná po zotavení na potvrdenie neprítomnosti protilátok. Určené a pre preventívne vyšetrenie. Pri nízkej koncentrácii patogénu v krvi nedokáže PCR (kvalitatívna) nič zistiť, pretože diagnostický systém má svoje prahové hodnoty citlivosti. V prípade počiatočného štádia ochorenia alebo miernej formy je PCR nakoniec diagnostikovaná s ultrasenzitívnym zariadením.

Čo je RNA vírus?

Termín RNA vírusu hepatitídy C (alebo RNA vírusu hepatitídy C) sa nazýva samotné ochorenie pečene. Vírus C sa viaže na zdravú bunku tela, ktorá preniká do vnútra. V priebehu času sa šíri po celom tele, je to len dostať do krvi. Výsledkom je, že patogén preniká do pečene, spojí sa s bunkami a pracuje tvrdo. Hepatálne bunky (hepatocyty) pracujú pod vplyvom, podstupujú zmeny a z tohto zahynú. Čím dlhší je vírus C v pečeni, tým viac buniek zomrie. Postupom času sa rozvíjajú nebezpečné choroby vedúce k zhubnej degenerácii a smrti.

Infekcia pečene týmto typom vírusu sa nemôže v žiadnom prípade prejavovať zvonka. Po mnoho rokov alebo desiatky rokov sa infikovaná osoba cíti úplne zdravá a iba náhodná vyšetrenie najčastejšie odhaľuje patológiu. Pri darovaní krvi na hepatitídu sa skúma časť reťazca RNA (ribonukleovej kyseliny), ktorá je súčasťou ľudského génu (DNA). Výsledky laboratórneho výskumu by sa nemali používať na samošetrenie, pretože to je iba indikátor. Lekár určí presný obraz a ďalšiu diagnózu.

Po vykonaní: svedectvo o štúdii

Na potvrdenie HCV je priradená analýza PCR (polymerázová reťazová reakcia). PCR štúdie pomáhajú nájsť patogénny materiál v štruktúre RNA a predpísať účinnú liečbu. Určené v nasledujúcich prípadoch:

• identifikácia príznakov zápalu pečene;
• skríningové štúdie na prevenciu;
• vyšetrovanie osôb v kontakte;
• diagnostika hepatitídy zmiešaného pôvodu (definícia hlavného patogénu);
• Určenie úrovne aktivity reprodukcie vírusu v chronickej forme;
• cirhóza pečene;
• na určenie účinnosti predpísanej liečby.

PCR štúdie sú pridelené lekárom na stanovenie účinnosti priebehu liečby hepatitídy.

Existuje kvalitatívna aj kvantitatívna analýza PCR. Kvantitatívna PCR ukazuje percento RNA s nosičmi vírusu v krvi a kvalitatívna PCR indikuje prítomnosť alebo absenciu vírusu. Pozitívny ukazovateľ kvality (prítomnosť RNA hepatitídy C) tiež vyžaduje kvantitatívnu štúdiu. Vysoká koncentrácia patogénu hepatitídy C súvisí s rizikom prenosu, to znamená s kontamináciou ostatných. Nízke množstvá sú lepšie spracované. Množstvo RNA vírusov v krvi sa netýka intenzity ochorenia. Analýza PCR sa tiež robí v prípade terapie interferónom, aby sa predpísalo trvanie a zložitosť liečby.

Vlastnosti kvalitatívnej analýzy PCR pre hepatitídu C

Menovaný kvalitatívnej analýze s indexom polymerázovej reťazovej reakcie, všetci pacienti, ktorí mali protilátky v krvi, pre hepatitídu C, ktorý bol chorý a výške, by mali znovu sa test. Odporúča sa, aby sa testuje na hepatitídu B a potom, v prípade, že pozitívny záver, a hepatitídy D. tiež kvalitatívne analyzovaný reakatsiya by sa malo uskutočniť v spojení s inými krvných testov. Analýzy ukážu kompletný obraz šírenia vírusu.

Z výsledkov testov bude vidieť len pozitívny test na hepatitídu C alebo negatívnu, čiže prítomnosť alebo neprítomnosť vírusu. Ak je záver "zistený", potom je vírus aktívne a naďalej aktívne. Označenie "nenájdené" označuje neprítomnosť vírusu alebo jeho malé množstvo. S týmto indikátorom by sa malo brať do úvahy skutočnosť, že analytická citlivosť diagnostických systémov je iná a RNA hepatitída C môže byť stále v krvi, ale v analýze sa nezobrazuje.

Obzvlášť citlivá metóda PCR ultra-hepatitídy C sa odhaľuje dokonca aj v nepatrných množstvách. Používa sa hybridizačná fluorescenčná štúdia, ktorá je mnohonásobne vyššia ako štandardné systémy PCR. Metóda sa používa v niekoľkých prípadoch:

• podozrivé skryté formy hepatitídy C;
• Diagnóza PCR nebola potvrdená patogénom, ale existujú protilátky;
• v prípade obnovy;
• identifikovať skorý štádiu infekcie.

Späť na obsah

Vysvetlenie analýzy

Konečné rozhodnutie v diagnostike je ovplyvnené PCR dekódovaním HCV, najmä ultrametódou. Hlavnou nevýhodou tohto výskumu je prísne dodržiavanie sterilných podmienok pre vzorku a materiály. Malá odchýlka niekedy preukazuje nepresné závery analytika, komplikuje diagnostiku a následnú liečbu. Analýza PCR na stanovenie RNA vírusu hepatitídy nie vždy ukazuje obraz choroby s dôverou, niekedy aj neprijateľné sú nepresnosti.

Pri diagnostike vírusu hepatitídy sa odporúča vykonať komplexné vyšetrenie.

Norma ukazovateľov

Neprítomnosť protilátok JgM voči RNA vo vírusovej hepatitíde C sa považuje za normu pri analýze polymerázovej reťazovej reakcie. Súčasne zistenia sérologickej analýzy naznačujú prítomnosť protilátok proti vírusu C a to je tiež v medziach normy. Kvalitatívna definícia neukazuje intenzitu ochorenia, odhaľuje len pôvodcu hepatitídy C v RNA. Takáto analýza sa po liečbe opakuje, aby sa potvrdila skutočná regenerácia.

odchýlky

Ak sú prítomné protilátky JgM proti HCV RNA, znamená to, že došlo k vzniku infekcie. Choroba je akútna alebo chronická, prejavuje sa v rôznych štádiách. Ak dôjde k poklesu počtu protilátok, analýza ukáže dosiahnutie výsledkov liečby počas regenerácie. V diagnostike sú veľmi zriedkavé prípady falošne pozitívnych zistení. Nachádzajú sa u žien počas tehotenstva a u ľudí s inými infekčnými chorobami.

Štúdia PCR pre hepatitídu C: typy, indikácie, transkript

Vírusová hepatitída C je závažné ochorenie, ktoré sa vyskytuje pri poškodení pečene. V ôsmich percentách pacientov prechádza do chronickej formy. Vírus sa množí v pečeňových bunkách - hepatocytoch - a spôsobuje ich smrť. Mŕtve tkanivo sa nahradí ložiskami spojivového tkaniva, vyvíja sa fibróza.

S rozvojom fibrózy pečene, je schopný plniť svoju funkciu, začína cirhóza, čo je nebezpečné pre jeho komplikácií: zvyšujúci sa tlak v portálnej žile, gastrointestinálne krvácanie, poruchy zrážanlivosti krvi, mentálne zmeny kvôli poškodeniu mozgu jadra toxických produktov.

Príčinou tohto ochorenia je infekcia vírusom z rodiny Flaviviridae, čo je typ vírusu RNA. To znamená, že genetický materiál, pomocou ktorého sú syntetizované proteíny patogénu, je kódovaný molekulou kyseliny ribonukleovej. Infekcia sa prejavuje krvou, sexuálne a od tehotnej ženy až po plod. Bohužiaľ, medzi infekciou a začiatkom produkcie protilátok môže prejsť pomerne veľké množstvo času - od dvoch týždňov až po šesť mesiacov. To neumožňuje určiť infekciu metódou enzýmovej imunoanalýzy a začať liečbu v počiatočných štádiách.

Čo je analýza PCR?

PCR je metóda molekulárnej analýzy, ktorá umožňuje detekciu genetického materiálu patogénu už v prvom týždni po infekcii použitím polymerázovej reťazovej reakcie. Štúdia má vysokú špecifickosť, presnosť a umožňuje nielen určiť prítomnosť alebo neprítomnosť vírusu, ale aj jeho koncentráciu a genotyp.

Pre túto štúdiu vezmite pacientovu krv, v ktorej sa môže potenciálne nájsť RNA vírusu. V krvi sa pridajú priméry - umelo syntetizované časti požadovaného génu malej dĺžky a RNA polymeráza je špeciálnym enzýmom, ktorý znásobuje množstvo genetického materiálu patogénu. Pomocou špeciálneho zariadenia sa vykonáva niekoľko cyklov vykurovania a chladenia. Materiál sa potom analyzuje a porovná so známymi vírusovými génmi, na základe ktorých sa dospelo k záveru o prítomnosti alebo neprítomnosti infekcie.

Typy PCR analýzy pre hepatitídu C

Existujú tri typy analýzy PCR:

1. Kvalitatívna analýza PCR. Prvá fáza štúdie. Umožňuje vám identifikovať genetický materiál vírusu v krvi.

Kvantitatívna analýza PCR. Umožňuje určiť vírusovú záťaž - koncentráciu genetického materiálu patogénu v jednom mililitroch krvi. Táto štúdia sa uskutočňuje pred začiatkom liečby a potom v prvom, štvrtom, dvanástom a (ak je kurz dlhý) v dvadsiatom štvrtom týždni liečby, aby sa vyhodnotila jeho účinnosť.

genotypu. Príčinná látka hepatitídy C často a rýchlo mutuje. Na planéte bolo nájdených sedem variant genotypu tohto vírusu. V Rusku sú spoločné prvé, druhé a tretie typy. Každý z genotypov má rôznu rezistenciu voči terapii, napríklad účinnosť liečby prvého typu je šesťdesiat percent a pre druhý a tretí dosiahne osemdesiatpäť. Preto, aby sa vybrali vhodné lieky a aby sa predpísal postup liečby s dostatočným trvaním, je potrebné presne určiť, ktorý typ vírusu je pacient infikovaný.

Indikácie pre analýzu PCR pre hepatitídu C

Štúdia PCR je predpísaná v nasledujúcich prípadoch:

• kontakt s chorým, čo by mohlo viesť k infekcii;
• pozitívna enzýmová imunoanalýza;
• príznaky cirhózy pečene: zmeny veľkosti pečene, zväčšená slezina, výskyt podkožného venózneho plexu na bruchu;
• výskyt príznakov poškodenia pečene: bolesť na pravej strane brucha, žltnutie kože;
• zvýšená aktivita ALT a AST v biochemickej analýze krvi;
• pred začiatkom liečby na určenie vírusovej záťaže;
• sledovať účinnosť antivírusovej liečby;
• po dokončení liečby na monitorovanie relapsu;
• v prítomnosti diagnostikovanej hepatitídy B, aby sa vylúčilo zmiešané poškodenie pečene.

Dekódovanie štúdie PCR pre hepatitídu C

Dekódovanie analýzy PCR a enzýmovej imunoanalýzy pre hepatitídu C by mal riešiť špecialista na hepatológiu alebo infekčnú chorobu. Analýza výsledkov PCR je potrebná v kombinácii s biochemickým krvným testom, biopsiou a ultrazvukom. Iba kvalifikovaný lekár bude schopný analyzovať výsledky štúdií a na základe nich predpísať správnu liečbu.

Dekódovanie kvalitatívnej analýzy.

Genetický materiál patogénu sa našiel v analyzovanom biologickom materiáli. Infekcia je potvrdená.

Neexistuje žiadna infekcia alebo množstvo RNA patogénu je pod hranicou citlivosti.

Dekódovanie kvantitatívnej analýzy.

Normálna postava pre zdravých ľudí. Znamená to, že v testovanom materiáli nie je prítomná RNA hepatitídy C alebo jej koncentrácia je pod hranicou citlivosti v štúdii.

Koncentrácia RNA je pod rozsahom kvantifikácie. Takéto výsledky sú interpretované veľmi opatrne, korelujú ich s údajmi z iných štúdií a často vykonávajú druhú štúdiu.

Úroveň vírusovej záťaže pri danej koncentrácii sa považuje za nízku. Zvyčajne zníženie množstva vírusu znamená, že terapia je úspešná.

Viac ako 8 * 10 ^ 5 IU / ml

Úroveň vírusovej záťaže pri danej koncentrácii sa považuje za vysokú.

Viac ako 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

Množstvo RNA je nad hornou hranicou rozsahu kvantifikácie. Nie je možné vyvodiť závery o stupni vírusovej záťaže s týmto výsledkom. Zvyčajne sa v takýchto prípadoch opakuje test s riedením vzorky krvi.

Dekódovanie genotypizácie.

Bola detegovaná RNA špecifického genotypu

V biomateriáli sa deteguje vírus hepatitídy C špecifického genotypu a podtypu. Výsledok je kódovaný rímskymi číslicami a latinkami, napríklad - 1a, 2b. Existuje sedem genotypov a šesťdesiat sedem podtypov, avšak v Rusku existujú iba tri prvé typy.

Bola detegovaná RNA vírusu hepatitídy C

V krvi sa RNA nachádza ako vzácny genotyp pre Rusko, ktorý nemožno pripísať prvému, druhému ani tretiemu typu. Je potrebný ďalší výskum.

Tento výsledok naznačuje, že pacient je zdravý, alebo že úroveň RNA patogénu je príliš malá.

Situácia je možná, keď je analýza PCR pre hepatitídu C negatívna a enzýmová imunoanalýza deteguje protilátky proti vírusu. To znamená, že pacient mal hepatitídu C v akútnej forme a uzdravil sa. Približne dvadsať prípadov infekcie vedie k spontánnemu vyliečeniu, ak pacientovo telo vykazuje dostatočnú odolnosť voči infekcii.

Napriek tomu, že PCR je vysoko presná analýza, jej výsledky môžu byť deformované v nasledujúcich situáciách:

• krv bola prepravovaná do laboratória za neprimeraných podmienok, teplotný režim bol porušený;
• vzorka biomateriálu bola kontaminovaná;
• v krvi boli zvyšné stopy heparínu a iných antikoagulancií;
• V skúmanej látke boli inhibítory - látky, ktoré spomaľujú alebo zastavujú polymerázovú reťazovú reakciu.

Výhody PCR v porovnaní s inými metódami

1. Diagnóza v počiatočných fázach. PCR deteguje genetický materiál pôvodcu ochorenia. Pomocou imunofluorescenčnej analýzy je možné určiť iba imunoglobulíny - látky, ktoré telo produkuje ako odpoveď na infekciu. V prípade infekcie spôsobenej hepatitídou C môže byť interval medzi infekciou a nástupom imunitnej odpovede niekoľko týždňov a mesiacov, kedy bude ELISA neúčinná. PCR poskytne odpoveď už v prvom týždni po infekcii.

Nízka pravdepodobnosť chyby. V študovanom materiáli sa určuje genetický materiál, ktorý je charakteristický iba pre jeden typ patogénov. To vám umožňuje vylúčiť falošné výsledky. Pomocou testu ELISA sú možné chyby, pretože rovnaký druh protilátok sa môže uvoľniť proti rôznym vírusom - takéto protilátky sa nazývajú krížovo reaktívne.

Vysoká citlivosť. PCR môže detegovať RNA patogénu aj v minimálnych množstvách. To umožňuje identifikovať skryté infekcie.

Ako sa pripraviť na dodanie krvi na výskum PCR

Pri analýze PCR sa na hepatitídu C odoberá žilná ​​krv. Zvyčajne sa z pacientovej žily okamžite odoberú dve časti krvi: prvý sa odošle na PCR a druhý pre ELISA. To sa robí s cieľom presnejšie posúdiť, ako veľmi je pacient infikovaný vírusom a ako proti nemu bojuje imunita.

Zvyčajne sa od pacienta vyžadujú nasledujúce pravidlá:

• krvný test sa vyšetruje ráno;
• prestávka medzi posledným jedlom a dodaním krvi by mala byť 8 až 10 hodín;
• dva alebo tri dni pred analýzou sa musíte vzdať smažených a mastných jedál a alkoholu;
• dvadsaťštyri hodín pred analýzou by sa mal pacient vyhnúť fyzickej námahe: nenosia váhy, nechodia do telocvične ani do bazéna.

Kvalitatívna a kvantitatívna analýza PCR pre hepatitídu C: negatívne, pozitívne, dekódovanie

Hepatitída C je vírusové ochorenie pečene spôsobené flavivirusom HCV (z anglického vírusu hepatitídy C), ktorý obsahuje molekulu ribonukleovej kyseliny (RNA). RNA nesie genetický kód vírusu. Jeho prítomnosť umožňuje analýzu PCR pre hepatitídu C.

HCV je nebezpečenstvo pre človeka a to tzv sérologické okno (čas medzi infekciou a vzhľadu reakcie imunitného systému), môže byť dostatočne dlhý - od niekoľkých týždňov do šiestich mesiacov.

Toto neodhalí infekciu a začne liečbu včas.

V závislosti od individuálnych vlastností hostiteľského tela sa môže HCV prejaviť v akútnej forme a môže sa vyvinúť aj ako chronické ochorenie, ktoré si vyžiada dlhodobé a drahé liečenie. Pri detekcii protilátok proti HCV sa vykonáva niekoľko laboratórnych testov vrátane PCR pre hepatitídu C. Tento test sa uskutočňuje pre všetkých ľudí, v ktorých krvi sa našli protilátky proti HCV.

Čo je analýza PCR?

Laboratórna analýza PCR pre hepatitídu C - štúdium biologického materiálu na identifikáciu prítomnosti flavavírusu.

Polymerázová reťazová reakcia (ako skratka je dešifrovaná) ukazuje kvantitatívnu hodnotu vírusového poškodenia organizmu, jeho kvalitatívne charakteristiky a tiež genotyp vírusu obsahujúceho RNA.

Na základe týchto údajov a na základe ďalších analýz sa určuje spôsob a trvanie liečby, ako aj epidemiologický faktor (riziko prenosu na iného nosiča).

Čo je analýza RNA pre hepatitídu C?

Hepatitída C sa tiež nazýva analýza RNA (HCV RNA), pretože nie je známa. Flavavírus obsahuje časticu RNA s viriónovou veľkosťou 30-60 nm. Jednou z charakteristík tohto mikroorganizmu je vysoká tendencia k mutáciám.

Každý z poddruhov (genotypov) vírusu má odlišnú rezistenciu, ktorá spôsobuje rôzne spôsoby liečby a povahu ďalšej prognózy pre pacienta.

Biologický materiál (žilovej krvi) je riešené pôst a zvyčajne testované PCR v reálnom čase (vysoko citlivé v reálnom čase, diagnostika na stanovenie dolnej medze 15 IU / ml za použitia automatického režimu uzatvorený systém).

Existujú aj ďalšie testy, napríklad COBAS AMPLICOR s citlivosťou 50-100 IU / ml. Pri akejkoľvek laboratórnej štúdii je prah citlivosti dôležitý, t.j. schopnosť činidla detegovať minimálnu koncentráciu vírusu v biologickom materiáli.

Druhy analýzy hepatitídy C pomocou metódy PCR

PCR pre hepatitídu C zahŕňa tri dôležité zložky:

• kvalitatívna analýza;
• kvantitatívna analýza;
• genotypu.

Tieto testy môžu určiť povahu virémie, ako aj genetické znaky patogénu. V závislosti od citlivosti diagnostického systému sa test vykoná raz a niekedy sa vykoná druhá skúška s citlivejšou činidlom, ktorá potvrdí alebo spresní výsledky.

Vysoko kvalitná PCR proti hepatitíde C

PCR analýza kvality hepatitídy C je ďalším bežným názvom pre analýzu polymerázovej reťazovej reakcie. Štandardná citlivosť testu, ktorá umožňuje zistiť prítomnosť vírusovej lézie, je v rozmedzí od 10 do 500 IU / ml.

Negatívna analýza PCR pre hepatitídu C ukazuje, že koncentrácia vírusu v krvi pacienta je pod hranicou náchylnosti diagnostického systému.

Ak kvalitatívna PCR poskytla odpoveď "nezistená", potom je pre následnú liečbu dôležité poznať prah citlivosti činidla.

Proteínové frakcie na vírus flava sa objavujú oveľa neskôr.

Kvantitatívna PCR pre hepatitídu C

Kvantitatívna PCR hepatitídy C je indikátorom vírusovej záťaže, ktorá odráža hladinu koncentrácie RNA vírusu FLAV v tele. Toto je ukazovateľ, ktorý ukazuje, koľko fragmentov vírusovej RNA je obsiahnutých na jeden kubický centimeter krvi. PCR hepatitídy výsledkov Kvantitatívne skúška C RNA v konvenčnom systéme sú uvedené v medzinárodných jednotkách na ml (IU / ml), a môžu byť zaznamenané v rôznymi spôsobmi, napríklad - 1,7 ppm alebo 1,700,000 IU / ml.

Kvantitatívna PCR diagnostika hepatitídy C sa podáva pacientom pred začiatkom antivírusovej liečby av 12. týždni liečby na vyhodnotenie výsledkov vybranej metódy boja proti HCV. Vírusová záťaž vám umožňuje identifikovať tri dôležité indikátory ochorenia:

• infekčnosť, t.j. stupeň rizika prenosu vírusu z jedného nosiča na druhý (čím je vyššia koncentrácia flavavírusovej RNA, tým vyššia je pravdepodobnosť infekcie inej osoby, napríklad počas sexuálneho kontaktu);
• metóda a účinnosť liečby;
• trvanie a prognóza antivírusovej terapie (čím vyššie je vírusové zaťaženie, tým dlhšie trvá liečba).

Kvantitatívna PCR diagnostika hepatitídy C závisí od typu laboratórneho testu a prahu jeho citlivosti. Dolná hranica normy sa zvyčajne považuje za až 600 000 IU / ml, priemerná hodnota je v rozmedzí 600 000-700 000 IU / ml. Výsledky z 800 000 IU / ml a vyššie sa považujú za vysoké hladiny vírusu obsahujúceho RNA.

genotypu

Vzhľadom na vysokú mutačnú aktivitu HCV v prírode je dôležité v štádiu testovania určiť, ktorý genotyp vírusu je v krvi pacienta. Celkovo je na planéte zaznamenaných 11 genotypov vírusu hepatitídy C, ktoré zahŕňajú mnoho poddruhov. Na území Ruskej federácie sú 1, 2 a 3 spoločné.

PCR RNA hepatitídy C spolu s genotypizáciou je veľmi dôležitou súčasťou analýzy, pretože umožňuje lekárovi určiť rezistenciu (rezistenciu) vírusu, vybrať vhodné lieky a predpísať priebeh liečby.

Genotypovanie vám tiež umožňuje nepriamo určiť stav pečene. Napríklad genotyp 3 HCV je často sprevádzaný steatózou, v ktorej sa tuk nahromadí v bunkách tela.

Krvný test na PCR pri hepatitíde C by mal poskytnúť číslo, ktoré určuje genotyp. V laboratórnych odpovediach môže byť napísané "nešifrované" - a to znamená, že v ľudskej krvi existuje vírus, ktorý nie je určený skúšobným systémom. To môže naznačovať, že genotyp nie je pre danú geografickú oblasť charakteristický. V tomto prípade je potrebné opätovne prejsť analýzou s vyššou citlivosťou diagnostického systému.

Dekódovanie analýzy PCR pre hepatitídu C

Test na PCR proti hepatitíde C možno kvantifikovať na základe vyššie uvedených údajov. Pri prijímaní výsledkov laboratórnych testov sa zvyčajne uvádzajú tieto údaje:

• "Nájdené" / "nenájdené" (vysoko kvalitná PCR pre hepatitídu C);
• množstvo frakcií obsahujúcich RNA, napríklad 831,680 IU / ml (kvantitatívny PCR test);
• číslo, ktoré určuje HCV genotyp, napríklad - 1, 2, 3, 4;
• názov testu je najčastejšie v reálnom čase.

Najdôležitejšie je pri dešifrovaní PCR analýzy hepatitídy C druhá položka, ktorá ukazuje vírusovú záťaž určujúcu prognózu, spôsob a trvanie liečby.

Ak je analýza PCR pre hepatitídu C negatívna a ELISA pozitívna - čo to znamená?

Na dešifrovanie laboratórnych testov je dôležité kontaktovať špecialistu na hepatológiu alebo infekčnú chorobu, ktorý vysvetlí informácie prijaté v súlade s typom diagnostického systému a prahovou citlivosťou. V lekárskej praxi existuje veľa údajov o krvných testoch, ktoré môžu viesť k zámene osoby bez lekárskej výchovy.

Napríklad, v prípade, že test na HCV PCR negatívne a pozitívne ELISA, môže to znamenať, že v tomto okamihu v krvi pacienta nie je HCV, ale pred tým, než trpel akútnej formy hepatitídy C. Predpokladá sa, že pozitívny-linked ImmunoSorbent assay (ELISA), ukazuje, že v krvi sú produkované protilátky po invázii vírusu v minulosti. V modernej medicínskej praxi sa však analýza ELISA považuje za dostatočne spoľahlivú a často poskytuje atypické výsledky, takže lekári ju používajú ako primárne vyšetrenie. Pri diagnostike ochorenia sa špecialisti riadia presne pomocou PCR testov.

Užitočné video

V nasledujúcom videu je veľmi podrobné a zaujímavé povedať, aký je podstatou metódy PCR, ako sa vykonáva analýza:

záver

Venózna krv sa zvyčajne užíva na analýzu PCR s hepatitídou C. Najčastejšie ide o dvojité odbery biologického materiálu - pre test ELISA a priamo pre test PCR. Pre správne výsledky testov sa vyžaduje súlad s hlavnými pravidlami laboratórneho odberu vzoriek biologického materiálu:

• krv na analýzu sa podáva ráno na prázdny žalúdok;
• medzi jedlom a krvou by mala trvať najmenej 8 hodín;
• Pred vykonaním testu by ste mali tiež vylúčiť alkohol a vyprážané potraviny;
• Počas dňa pred podaním krvi sa musíte vyhnúť vysokej fyzickej námahe.

Výsledky krvného testovania sú zvyčajne pripravené na ďalší deň.